犬瘟热病毒感染病例的诊断与病毒分离鉴定.pdf

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1、84中国兽医杂志2015年(第51卷)第6期犬瘟热病毒感染病例的诊断与病毒分离鉴定黄文明，沈明华(1．青海省海南州同德县畜牧兽医工作站，青海同德813200；2．青海大学畜牧兽医学院，青海西宁810016)中图分类号：$853．655文献标志码：A文章编号：0529-6005(2015)06—0084—02犬瘟热(Caninedistemper，CD)是由犬瘟热病1．5RT—PCR检测根据参考文献[3】合成犬瘟热毒(CaninedistempervirLts，CDV)引起的一种传染病毒检测引物，提取病犬的分泌物和排泄物的病性极

2、强的急性、病毒性传染病，宿主范围较广泛，毒基因组，按照参考文献f3]的RT—PCR反应条件能够使犬、貂、貉、狐、熊、小熊猫、大熊猫、狼、狮、进行扩增，RT—PCR扩增产物经核酸电泳观察虎、金猫、猞猁等多种动物发生自然感染和发结果。病。CDV在我国犬中的发病率和致死率都很高，1．6病毒的分离培养将1．4中病犬的分泌物和宠物犬一旦感染后发病率可达100％，死亡率也排泄物稀释液用0．45m的滤器过滤除菌作为病高达80％，许多经济动物如水貂等一旦感染发病毒液，接种单层非洲绿猴肾细胞系(Vero)贴壁细也会给养殖场带来严重的经济损失[1

3、-2]。近年来胞，37℃作用1h后，加入含2％新生牛血清的国内不断有犬瘟热病毒感染发病的报道，应引起DMEM维持液培养基，置37培养箱中培养，每对该病毒的重视，加快相应新型疫苗与诊断试剂天观察细胞病变，当出现70％～80％细胞病变时的研究。本研究对临床上1例发病犬进行临床和收获病毒，盲传3代，冻存备用。实验室诊断，并分离到了病毒，最后确诊发病犬1．7分离毒株血凝价测定96孔V型板第一排感染了犬瘟热病毒，介绍如下。的l2个孑L中依次加入生理盐水25L，取第3代分离毒株25L加入第一孑L，混合后取25L加1材料与方法入第二孔，依次

4、稀释到第11个孔，即2“稀释，第1．1试验材料取临床发病的分泌物和排泄物12孔作为空白对照，取25L1％鸡红细胞加入进行相关诊断；犬瘟热抗原快速检测卡，购自深上面孔中，37放置1h，观察血凝试验结果。圳市康百得生物科技有限公司；一步法RT—PCR1．8分离毒株毒价测定用96孔微量细胞培养检测试剂盒、DL一2000DNAMarker，购自宝生物板测定细胞半数感染量(TCID。)，将分离毒株做工程(大连)有限公司。10～10。倍梯度稀释，分别接种96孑L细胞培养1．2临床症状发病犬2月龄，临床可见眼结膜板培养的Vero细胞，每个稀

5、释度接种8个孔，0．1潮红，分泌物多，有眼屎。精神沉郁，卧地不愿走mL／孔，置5％CO培养箱37℃培养7d，逐日观察动，发热，体温高达41．5℃，吃食减少，便血，未进记录细胞病变情况，根据Reed—Munch法计算行过犬瘟热疫苗的免疫接种，根据临床症状初步TCID。。怀疑为犬瘟热病毒感染。1．9分离毒株RT—PCR检测按照1．5的方法对1．3镜检取病犬的分泌物和排泄物，涂片、染第3代分离毒株进行RT—PCR检测。色、做美蓝和革兰染色电镜镜检。1．10分离毒株的中和试验将第3代分离毒株1．4试纸条检测利用商品化的犬瘟热病毒检与等

6、量抗犬瘟热病毒特异性血清混合均匀后，置测试纸条进行检测。用干净的棉签蘸取病犬的4℃中和反应过夜，次日接种单层Vero贴壁细胞，分泌物和排泄物，放到专用稀释液中充分搅拌，观察细胞病变情况，同时设不接种和接种第3代用吸管吸取上清液，在试纸条样品孔正中滴加1分离毒株分别作为阴性对照和阳性x,tN。滴吸液，10rain后，观察结果。2结果收稿日期：2014—05—28作者简介：黄文明(1973一)，男(回族)，兽医师，本科，研究方向2．1镜检结果病犬的分泌物和排泄物镜检未为兽医临床，E—mail：huanwenming1973@126

7、．com见任何致病菌。86中国兽医杂志2015年(第51卷)第6期诊治犬传染性性病肿瘤李培德，侯凤香，胡霖，金俊杰，侯加法(1．温州科技职业学院动物科学系，浙江温州325006；2．南京农业大学动物医学院，江苏南京210095)中图分类号：$858．292文献标志码：B文章编号：0529—6005(2015)06—0086-02犬传染性性病肿瘤(TransmissibleVenereal吸数、体温等参数均正常；包皮内有血性分泌物Tumor，TVT)，是一种良性的源于网状内皮组织的滴下；阴茎中部表面有多个直径为2～6mm的粉肿瘤

8、，主要影响外生殖器，偶尔可累及内生殖红色至红色增生物；在阴茎根部，大量增生物相器。通常通过性传播，多发于青年、性成熟犬。互融合呈菜花状，质脆易碎(见中插彩版图1)。临床表现主要为外阴部不适，出现血性分泌物，2实验室检验与诊断菜花样增生物。世界各地发生的TVT，其肿瘤细胞均含有