间接免疫荧光法与酶联免疫吸附试验检测抗核抗体对比分析.pdf

《间接免疫荧光法与酶联免疫吸附试验检测抗核抗体对比分析.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、实用医学杂志2011年第27卷第l3期2449间接免疫荧光法与酶联免疫吸附试验检测抗核抗体对比分析夏勇李齐光唐希才邱志超摘要目的：应用间接免疫荧光法(indirectimmunofluoreseentassay，IF)与酶联免疫吸附试验(enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA)检测临床疑似自身免疫疾病患者血清抗核抗体并进行相关性及对比分析。方法：IF法按说明书操作，在荧光显微镜下观察到特异的荧光核型为阳性：ELISA法按说明书操作，浓度≥18U／mL为阳性．12—18U／mL为可疑，≤12U／mL为

2、阴性。结果：检测临床疑似自身免疫患者血清138份，IF法阳性50份，阴性88份，阳性率36．23％，ELISA法阳性78份，阴性60份，阳性率56．52％经卡方检验P<0．01。其中IF法样本血清稀释倍数与ELISA法检测浓度的Spearman相关系数为0．499结论：两种方法检测抗核抗体差异有显著性，ELISA法敏感度明显高于IF法。同时，IF法样本血清抗核抗体血清稀释倍数与ELISA法的浓度呈一定相关性关键词抗核抗体：间接免疫荧光法：酶联免疫吸附试验抗核抗体(antinuclearantibody，ANA)是一组1材料与方法将自

3、身真核细胞的各种成分作为靶抗原的自身1．1实验材料标本来自中山大学附属第三医院抗体的总称，能与所有动物的细胞核发生反应，风湿科临床疑似自身免疫病患者血清138份。IF主要存在于血清中，也可存在于胸水、关节滑膜试剂为欧蒙(德国)医学实验诊断公司生产的液和尿液中。ANA在多种自身免疫病中均呈不Hep一2细胞生物薄片。ELISA试剂盒购自AESKU同程度的阳性，如系统性红斑狼疮(SLE)、类风公司的ANA定量检测试剂盒ELISA．ANA．HEP．2。湿性关节炎(RA)、混合性结缔组织病(MCTD)、1．2实验方法干燥综合征(ss)、硬皮病

4、、慢性活动性肝炎等。1．2．1IF法检测ANA血清1：100稀释后按试剂ANA的检测在自身免疫疾病的临床诊断、鉴别诊说明书操作。设立阴性对照及阳性对照血清。在荧断、评价疗效和预后估计中具有较大的意义，因光显微以出现特异性荧光模型的最高血清稀释度此常将ANA的检测作为自身免疫疾病的重要初为阳性结果，并将荧光核型分为均质型，斑点型。筛试验。临床上最常用的间接免疫荧光法核仁型等。(indirectimmunofluoreseentassay，IF)被认为是检1．2．2ELISA法检测抗核抗体利用德国AESKU测ANA的金标准．然而酶联免疫

5、吸附试验公司ELISA．ANA．HEP．2试剂盒测定所搜集的标(ELISA)法由于其很容易实现自动化并不需要操本。样本稀释度为1：101。检测结果以吸光度OD作者的高技能水平，也被越来越多地用来检测值表示。该试剂盒包含有6个已知浓度的标准品：ANA。国内外对IF与ELISA检测ANA之间的对A：0U／mL，B=3U／mL，C=10U／mL，D：30U／比研究较多．但对IF的血清稀释度与ELISA的mL，E=100U／mL，F=300U／mL，通过绘制标准浓度之间的相关性分析未见报道。本文采用IF曲线将测得的吸光度OD值转换成具体浓度

6、数值和ELISA对138份临床疑似自身免疫疾病患者以U／mL为单位(下图为标准曲线)。浓度>18，判血清进行检测．以IF法作为金标准，研究ELISA定为阳性，浓度<12，判定为阴性，浓度在12检测抗核抗体的性能，并探讨两者之间的相关18，判定为可疑。同时．如EILISA检测样本血清性ANA浓度浓度超过300U／mL。该样本稀释10倍再进行检测。1．2．3标准曲线绘制运用标准曲线绘制软doi：10．3969~．issn．1006—5725．2011．13．062件CurveExpert1．3。采用试剂盒说明书所要求的作者单位：5101

7、50广州医学院第三附属医院检验科(夏勇，唐希才，邱志超)；510630广州市，中山大学附属第三医院风湿4．ParameterFit数学模式。经过检验标准曲线r：科(李齐光)0．9998，所绘制的标准曲线达到所需要的标准。实用医学杂志2011年第27卷第l3期il>1．3统计学分析各分组所得计量数据采用表3ELISA与IF两种方法的检测结果例∞加㈣瑚SPSSIO．0软件处理，两组间率的比较用卡方检验。检验水准=0．01．P<0．01为差异有统计学意义。2结果35O2．1IF阳性标本结果及其稀释度见表1。工作曲线，曲线下面积为0．930

8、，同时当浓度为表1IF阳性标本结果及2其稀2释2度1O60．09U／mL时，检测敏感度、特异度最佳(图2)。稀释度均质型颗粒型胞浆型核仁型着丝粒型周边型O1l1O01OOO2．2ELISA标准曲线绘制见图1。330．00—275．O0