甲状旁腺素对新生大鼠心肌细胞肥大反应及其凋亡的影响.pdf

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1、山东医药2014年第54卷第47期甲状旁腺素对新生大鼠心肌细胞肥大反应及其凋亡的影响张伟兵，张慧，王林，王志鹏。元锦花(1哈尔滨医科大学附属第四医院，哈尔滨150001；2哈尔滨医科大学附属第一医院)摘要：目的观察甲状旁腺素1—34(PTH1—34)对新生大鼠心肌细胞肥大反应和凋亡的影响。方法将原代培养新生大鼠心肌细胞分为对照组及低、中、高剂量组，对照组加入PBS缓冲液，低、中、高剂量组分别加人终浓度为0．1、1．0、10．0~moVL的PTH1—34，孵育24h。采用LS~500液体闪烁仪检测各组心肌细胞H一亮氨酸(Leu)掺人量，ELISA法检测心房利钠尿肽(ANP)和

2、Caspase一3，流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果与对照组比较，低剂量组H—Leu掺人量和ANP水平升高，中、高剂量组H—Leu掺入量、ANP水平、Caspase~水平、凋亡率升高(P均<0．05)；与中剂量组比较，高剂量组H—Leu掺入量、ANP水平降低，Caspase一3水平、凋亡率升高(P均<0．05)。结论低浓度PTH1—34可诱导新生大鼠心肌细胞肥大反应，较高浓度VI'H1．34还可诱导心肌细胞凋亡。关键词：甲状旁腺素1—34；心肌细胞；Caspase一3蛋白doi：10．3969／j．issn．1002~66X．2014．47．009中图分类号：R542．2文献

3、标志码：A文章编号：1002~66X(2014)47~031-03心肌肥厚是心脏对多种病理因素的一种适应性酶37℃水浴摇床反复消化。将收集细胞悬液过滤反应，也是心血管各种并发症发病与病死的独立危后，1000r／rain离心10min，取沉淀以10％血清险因素。多种刺激包括压力负荷、血管紧张素．Ⅱ、DMEM重新悬浮，差速贴壁90min去除成纤维细内皮素-1、儿茶酚胺等均可导致心肌肥厚¨“。这胞，未贴壁的细胞按照实验目的调整细胞密度后移些刺激因素可能通过影响细胞内的各种信号活化肥人培养板中，在最初的48h内加入终浓度为0．1大相关基因，导致心肌细胞增大和凋亡，这些变化是mmol

4、／L5溴脱氧尿核苷抑制成纤维细胞的生长。心肌肥厚的主要病理变化，也是心肌肥厚向心力衰细胞在37℃、5％CO：条件下培养3d，换成无血清竭发生、发展的主要机制。甲状旁腺素(PTH)是由培养基继续培养1d，对照组加入PBS缓冲液，低、甲状旁腺分泌的激素，是一种重要的中分子尿毒症中、高剂量组分别加入终浓度为0．1、1．0、10．0毒素J。大量研究’显示，PTH与尿毒症患者心~mol／L的PTHI-34，孵育24h。肌肥厚和心力衰竭发生有关。既往研究发现，1．3心肌细胞H—Leu掺入量及ANP检测①H—PTH能在体外诱导新生大鼠心肌细胞发生肥大反Leu掺人量：细胞密度调整为5×10

5、／L，设6个复应，但PTH能否诱导心肌细胞凋亡尚不清楚。本研孔，每孔加入37kBqH-Leu。预冷的PBS洗涤2究观察了甲状旁腺素1—34(PTH1—34)对新生大鼠心次，以2．5g／L胰酶消化40S使细胞脱落，细胞悬液肌细胞肥大反应和凋亡的影响，旨在为PTH可能诱加入纤维滤膜中滤去液体，晾干，加入三氯醋酸固定发心力衰竭的机制研究提供实验证据。蛋白质，无水乙醇脱水。烘干滤膜，放入闪烁瓶中，1材料与方法加闪烁液，采用LS．6500液体闪烁仪测定。②ANP：1．1主要试剂DMEM干粉、胎牛血清、胰蛋白酶各组细胞进行干预后，用预冷PBS冲洗，超声破碎(Gibco公司)；甲状旁腺素

6、1-34(Sigma公司)；H-使细胞破坏，3000r／rain离心20min，仔细收集上Leu(北京原子能研究所)；5一溴脱氧尿苷(北京索莱清。按照大鼠ANPELISA试剂盒说明书进行操作，宝公司)；心房利钠尿肽(ANP)ELISA试剂盒(Santa以空白孔调零，450nm波长依次测量各孔OD值，根Cruz公司)；Caspase-3ELISA试剂盒o据标准曲线计算ANP的含量，每组设6个复孔。1．2心肌细胞培养及实验分组取1～3日龄1．4心肌细胞凋亡率及Caspase．3检测①细胞凋Wistar乳鼠心尖部分，剪碎至1mm大小，0．25％胰亡率：收集各组细胞，70％乙醇固定

7、，4℃过夜。加入PI染液，避光37℃孵育30rain。流式细胞仪(美基金项目：黑龙江省教育厅科学技术研究项目(11531153)。国BD公司)采集数据进行亚二倍体的百分比分析。31山东医药2014年第54卷第47期CellQuest软件分析每个样本10000个细胞，结果用基本机制是心室的心肌重构。心肌细胞肥大、凋百分比表示。②Caspase一3：收集各组细胞上清液，亡均是心肌重构的特征性改变。其中，心肌细胞凋3000r／min，离心10min去除颗粒和聚合物，各取亡在心肌肥厚中的重要性Et益受到重视，心肌细胞50加