积雪草苷对人胃癌SGC-7901细胞株转移能力和凋亡影响.pdf

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1、四川生理科学杂志2015；37(2)47积雪草苷对人胃癌SGC一7901细胞株转移能力和凋亡影响*康敏任美萍纶赵磊。邓明明李昌平(1．泸州医学院附属医院消化内科，四川泸州646000；2．泸州医学院药品与功能性食品中心，四川泸州646000；3．哈尔滨医科大学第二医院消化内科，黑龙江哈尔滨150081)摘要目的：观察积雪草苷对人胃癌sac-7901细胞株转移能力和凋亡的影响。方法：采用细胞计数法(CCK-8)检测不同浓度的积雪草苷对人胃癌SCIC-7901细胞株增殖影响；细胞黏附试验检测细胞体外黏附能力的变化，Transwel1试验检测细胞体外侵

2、袭能力的变化，流式细胞仪AnnexinV／PI双染法检测细胞凋亡率。结果：积雪草苷明显抑制人胃癌SGC_7901细胞株增殖，积雪草苷处理后人胃癌sac-7901细胞株黏附能力分别下降到61．2，47．6，38．6；侵袭能力分别下降到42．3，31．7，21．6％；AnnexinV／PI双染法检测显示积雪草苷可诱导人胃癌S0c_7901细胞株凋亡，与阴性对照组比较，差异有统计学意义(P<0．01)。结论：积雪草苷能抑制人胃癌aGE-7901细胞株的增殖，抑制其体外粘附和侵袭能力，诱导其凋亡。关键词：积雪草苷；胃癌；凋亡；转移胃癌是目前致死率位居所有

3、肿瘤致死率第二位的恶性肿1．3方法瘤，严重危害人类健康。胃癌可以通过手术药物治疗等方式进1．3．1CCK-8检测积雪草苷对人胃癌So7901细胞株增殖行治疗，但转移率高，胃癌死亡主要与胃癌转移有关，免疫应的抑制作用答、机体免疫功能下降，新血管增生等可能与肿瘤转移有关【1]。人胃癌SGC-7901细胞株采用含1O胎牛血清的RP—中药能提高机体免疫力，抑制肿瘤生长，能否从中药中寻找抑MI1640培养基，在37℃、5COz条件下常规培养，实验取对数制肿瘤转移的有效药物是日前研究的一个方向。积雪草苷生长期的细胞。细胞常规胰酶消化后制成单细胞悬液，调整细(

4、Asiatieoside，AS)是从传统中草药积雪草中提取出的一种生物胞数为(4～5)×10·L～，细胞接种于96孔板中，每孔9O1，碱，以往研究主要集中在AS抗炎、抗氧化、抗衰老的治疗上[，在37℃、5COz条件下常规培养24h，分别加人终浓度为400、目前研究显示积雪草苷也具有抗肿瘤活性，有学者发现积雪草200、100、50、25g·ml的积雪草苷，阴性对照组加入等体积苷对人肝癌细胞株，胃癌细胞株，$180等肿瘤均有诱导凋亡作的RPMI1640培养基继续培养48h，随后每孔加人CCK8lOl用r3]。但目前积雪草苷对人胃癌细胞SC_．42-7

5、901转移能力有无继续培养1h，酶标仪450Ilm波长下检测各孔吸光度A值，计影响目前尚不清楚。据此本研究通过观察积雪草苷干预后对算细胞生长抑制率，细胞增殖抑制率=[1一A给药组一A空觚)／人胃癌细胞SGC-7901的浸润和粘附以及凋亡的影响，为积雪(A性对照组一A室自孔)]×i00，Logit法计算半数抑制浓度草苷用于防治胃癌提供科学依据。(IC5o)。1．3．2积雪草苷对人胃癌S0C_7901细胞株侵袭能力的影响1材料与方法Transwell小室4"C预冷，将趋化因子人纤连蛋白(Fibrone—1．1药品与试剂ctin，FN)涂于小室下层，M

6、atrigel胶包被于小室上层，37℃孵育积雪草苷(成都普斯生物科技有限公司，纯度98，溶于1h。根据1．3．1结果，选取积雪草苷干预浓度为200、100、DMSO中，终浓度低于1‰)；CCK-8试剂盒(碧云天生物技术50g·ml-。。将实验分为阴性对照组(培养基)，积雪草苷干研究所)；Annexinv_FITC试剂盒(南京凯基生物科技发展有限预组(细胞+积雪草苷200、100、50p．g·ml)。实验步骤为先公司，中国)；Transwell小室(CostarCambridge公司，美国)；将对数生长期的人胃癌SCA2-7901细胞株经不同浓度积

7、雪草苷Matrigel胶(BD公司，美国)；人胃癌SGC-7901细胞株(上海拜处理24h，阴性对照组细胞正常培养不作处理。之后收集细力生物试剂有限公司，中国)。胞，取5×1O细胞悬浮于小室的上层，小室下方加人含0．11．2仪器BSA的培养基600l，37℃孵育24h。经多聚甲醛固定，HE染CKX41型倒置相差显微镜(日本Olympus公司)；MCO一色。每组4复孔，显微镜下选取5个视野计算穿过滤膜的细胞15A型CO2培养箱(日本Sanyo公司)；5501型酶标仪(bio-rad，数，计算平均值。实验重复3次。美国)；流式细胞仪(美国BD公司，S

8、BK-YLQX-003552型)；1．3．3积雪草苷对人胃癌SCK；-7901细胞株黏附能力的影响SW-CJ-1F型)超净工作台(苏州净