流式细胞术检测全血白细胞吞噬白念珠菌方法的建立和应用.pdf

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1、470细胞与分子免疫学杂志(ChinJCellMolImmuno1)2015，31(4·论著·文章编号：1007—8738(2015)04—0470—04流式细胞术检测全血白细胞吞噬白念珠菌方法的建立和应用贺政新，陈晶，王宪灵，赵博华，侯天文(解放军白求恩国际和平医院检验实验科，河北石家庄050082)[摘要]目的建立全血白细胞吞噬白念珠菌的流式细胞术检测方法。方法绘制白念珠菌生长曲线后，取生长对数中期的白念珠菌，以活体细胞示踪荧光探针二乙酰羧基荧光黄琥珀酰亚胺酯(CFDA—SE)标记，与以PC5标记的CD45单克

2、隆抗体预标记的全血白细胞，在37％分别反应10、30、60rain(MOI10：1)，以流式细胞术观察CD45阳性细胞对白念珠菌的吞噬情况。结果白念珠菌在液体酵母浸出粉胨葡萄糖培养基(YPD)中37％、50mL／LCO：培养，第5～11h为对数生长期。10mmo~LCFDA—SE染色30min，可使白念珠菌均匀着色；CD45阳性细胞和标记的白念珠菌作用10、30、60min，CIM5阳性细胞中中性粒细胞的吞噬率分别为(80．1±6．1)％、(83．8-4-7．7)％和(92．3±11．2)％；单核细胞的吞噬率为(1

3、1．2±36)％、(15．8±4．4)％和(27．7±6．8)％，淋巴细胞作为无明显吞噬作用内参，其吞噬率为(O．9±0．3)％、(0．8±0．4)％和(5．2±1．6)％。结论成功建立流式细胞术检测全血白细胞吞噬白念珠菌的方法，全血白细胞与白念珠菌共孵育30min是较为合适的作用时间。[关键词]流式细胞术；白念珠菌；吞噬[中图分类号]R379．4，R392．12[文献标志码]BWholebloodleukocytephagoeytosisassayforC船a／b／cansbasedonflowcytometry

4、HEZhengxin，CHENJing，WANGXianling，ZHAOBohua，HOUTianwenDepartmentofClinicalLaboratory，BethuneInternationalPeaceHospital，Shijiazhuang050082，ChinalAbstractJobjectiveToestablishawholebloodleukocytephagocytosisassayforCandidaalbicans(C．albicans)basedonflowcytometry(

5、FCM)．MethodsGalbicansofmid-Iogarithmicgrowthphasewaslabeledbyfluorescenceprobecarboxyfluoresceindiacetatesuccinimidylester(CFDA-SE)。andthenaddedintoCDl45-PC5pre-stainedhumanwholebloodcellsata10：1multiplicityofinfection(MOI)in37oC．Thecelswereincubatedfor10，30an

6、d60minutes．Phagoc~osisrateOfC．a~icansbytheCD45positivecellsinthebloodwasdeterminedbyFCM．Resultslnyeastextractpeptonedextrosemedium(YPD)andundertheconditionsof37oCand50mL／LCO2，thelogarithmicgrowthphaseofC．a~icansSC5314wasfr0mthe5thtol1thhour．C．a~icanswerewellst

7、ainedby10mmOl／LCFDA-SEafter30-minuteIncubation．After10·．30-and60一minuteincubationwithSC5314C．a~icanswithCD45cells．thephagocytosisratesmeasuredbyFCMwere(80．1±6．1)％，(83．8±7．7)％and(92．3±11．2)％fortheneutrophils，(11．2±3．6)％，(15．8±4．4)％and(27．7±6．8)％forthemonocytesa

8、nd(0．9±0．3)％，(0．8±0．4)％and(5．2±1．6)％forthelymphocytes．Conclusion111emethodformeasunngwholebloodleukocytephagocytosisofC．a~icansbasedonFCMissuccessfullyestablished，and30minutesareth