链脲佐菌素诱导急性非糖尿病小鼠胰岛β细胞凋亡模型的建立.pdf

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1、广东医学2015年5月第36卷第9期GuangdongMedicalJournalMay．2015，Vo1．36，No．9-1335·链脲佐菌素诱导急性非糖尿病小鼠胰岛I3细胞凋亡模型的建立术覃海静，卢德成，邝晓聪，尹健兰，黄雪梅，梁杏欢‘广西医科大学第一附属医院内分泌科(南宁530021)；广西医科大学病理生理教研室(南宁530021)；广西南宁市第一人民医院内分泌科(530021)【摘要】目的以非致糖尿病的小剂量链脲佐菌素(STZ)诱导BABL／C小鼠胰岛p细胞发生凋亡，建立小鼠急性损伤胰岛细胞凋亡的模型，明确其诱导胰岛B细

2、胞凋亡的发生规律，为胰岛p细胞凋亡相关研究提供在体模型。方法选取BABL／C小鼠，分别予生理盐水(对照组)及6O、80、100mg／kg小剂量STZ一次性腹腔注射(实验组)，观察时点分别为干预后6、12和24h，动态观察指标为血糖、胰腺HE染色观察病理改变以及末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口标记技术(TUNEL)检测胰岛B细胞凋亡。结果在所有测试时点血糖均在6—11mmol／L范围内波动，未达到糖尿病模型范畴，TUNEL凋亡检测发现：与对照组相比，实验组各时点的胰岛B细胞凋亡率均明显升高(P<0．05)；各实验组均在12h

3、时点凋亡率达到最高峰，并且80mg／kg组与60mg／kg、100mg／kg组相比明显升高(P<0．05)。结论非致糖尿病的小剂量STZ可成功构建急性非糖尿病小鼠胰岛p细胞凋亡模型．凋亡高峰期在注射后12h时点。【关键词】链脲佐菌素；胰岛B细胞；凋亡；动物模型2型糖尿病(T2DM)的发病过程是从正常糖耐量、1．2方法糖尿病前期、糖尿病，从正常糖耐量到糖尿病前期有胰1．2．1急性小鼠胰岛B细胞凋亡模型建立与取材岛素代偿分泌维持血糖正常。而研究发现在糖尿病确BABL／C小鼠(n=60)禁食不禁水12h，配制1％STZ诊时(包括新诊断

4、T2DM)胰岛B细胞总量即减少达溶液，分别以60、80、100mg／kg腹腔一次性注射，注射50％⋯，胰岛B细胞凋亡是导致糖尿病的重要病理生在配制后15rain内完成。选取6只正常同龄BABIfC理学过程，是糖尿病患者胰岛B细胞总量减少的主要小鼠为对照组予生理盐水。造模过程中未有小鼠死原因，因此推断在糖尿病发生以前的胰岛功能代偿期亡。模型组胰腺取材检测时点为每个注射浓度干预后也可能存在B细胞凋亡这一损失模式，提示可通过抑6、12和24h，取小鼠胰腺，以4％甲醛溶液固定，每个制胰岛13细胞凋亡而达到保护胰岛功能的目的，最时间点／2

5、=6。终达到减少糖尿病的发生。但在目前的实验研究中探1．2．2小鼠血糖检测除干预前取材外，其余按模型讨胰岛B细胞凋亡的模型多为链脲佐菌素(streptozoto—组胰腺取材检测时点，取尾静脉血以罗氏血糖仪检测cin，STZ)诱导的糖尿病模型，缺乏早期胰岛p细小鼠血糖，方法参照说明书。胞凋亡损伤且来达到糖尿病状态的动物模型研究。鉴1．2．3小鼠胰腺HE染色检测病理改变取固定的于STZ可靶向损伤胰岛B细胞，是建立糖尿病模型的小鼠胰腺，制成腊块并切片，行HE染色，在光镜下观经典试剂。因此2013年l0月至2014年9月，本研察其病理改

6、变。究选取BABIfC小鼠，以非致糖尿病的小剂量STZ诱1．2．4TUNEL法检测小鼠胰腺细胞凋亡取小鼠胰导急性胰岛B细胞发生凋亡，探讨小鼠急性损伤胰岛腺组织的石蜡切片，按TUNEL试剂盒说明书操作。所p细胞凋亡模型的建立模式，明确STZ诱导胰岛p细有切片在高倍视野下(×400)拍照，每只小鼠胰腺切片胞凋亡的早期损伤发生规律，尤其是为胰岛代偿范畴依次选择5个胰岛(共计200—500个细胞)，分别计数内早期胰岛B细胞保护以及凋亡机制的实验研究提供凋亡细胞和总细胞数，凋亡指数(apoptoticindex，AI)=小鼠模型。(B细胞

7、凋亡数／胰岛细胞总数)×100％。1材料与方法1．3统计学方法采用SPSS16．0统计软件，行完全随机设计的方差分析。1．1实验材料BABL／C小鼠(SPF级)，8周龄，雄性，体质量20～22g，购白广西医科大学实验动物中心2结果(动物许可证号：SCXK桂2009—0002)；STZ(美国Sig—2．1各组小鼠血糖动态变化情况各组小鼠中单次ma公司)；血糖仪(美国Roche公司)；Tunnel细胞凋亡注射不同剂量的STZ后，与对照组比较血糖均明显升检测试剂盒(美国Roche公司)。高(P<0．05)，其中血糖升高的水平跟STZ注

8、射剂量的大小成正比，在12h时点随着剂量的增大血糖升广西自然科学基金资助项目(编号：2013GXNSFAAO19202)高。随着时间点的延长，血糖会出现轻度的回落(血糖△通信作者。副教授；E—mail：lxhcnnn@163．con波动范围6～11mmolfL)