感染鸭乙型肝炎病毒鸭外周血CD4＋和CD8＋T淋巴细胞水平变化.pdf

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1、·290·实用肝脏病杂志2015年5月第18卷第3期JPracHeoatol，May．2015．vo1．18No．3·短篇论著·感染鸭乙型肝炎病毒鸭外周血CD4+和CD8+T淋巴细胞水平变化聂云天，刘伯阳，王琪【摘要】目的了解实验感染鸭乙型肝炎I型病毒(DHBV)的实验鸭外周血CD4q"和CD8q"淋巴细胞数变化及意义。方法采用经外周静脉注射含DHBV血清制备感染鸭，应用流式细胞仪检测感染DHBV实验鸭外周血CD4q'和CD8~T淋巴细胞数。结果在感染DHBV7日后，实验鸭血清HBsAg、鸭HBeAg和抗

2、一鸭HBc均阳性，说明感染成功，感染动物肝功能损害明显，血清ALT、AS[水平急剧升高，与健康对照组比，差异显著(P

3、应答D0I：10．3969~．issn．1672-5069．2015．02．018ChangesofperipheralbloodCD4andCD8TlymphocytesinduckhepatitisBvirusinfectedduckN／eYuntian，LiuBoyang,WangQi．QiqiharMedicalUnwe~i@，QiQiHar161006，Heilon~iangProvince，China【Keywords】DuckhepatitisB；CD4lymphoeytes；CD8q"ly

4、mphocytes；Peripheralblood全球乙型肝炎病毒感染者有3．5亿人，是严重危害人类1．3外周血生化和CD4q'和CD8q'细胞数检测在实验鸭健康的疾病。乙型肝炎病毒本身并不直接引起肝细胞病变。和健康鸭，分别经颈静脉取血2ml。依次用自动生化分析仪病毒感染者体内细胞复制，将病毒抗原释放到肝细胞膜上，检测血肝功能指标；每只动物取血400IXl，抗凝处理，将血激发机体的免疫反应，从而产生一系列临床症状。因此，免疫分装4个试管，向各管分别加入抗CD4一藻红蛋白(PE)40损伤是乙型肝炎病毒致病的

5、主要机制。本研究建立鸭乙型肝l，再依次加入抗CD8一PE40l、避光室温充分结合30炎病毒感染模型，分析了鸭外周血CD4q'细胞和CD8q'细胞min后，每管加入溶血素3ml，避光放置至透明后，3000r／m数的变化，现将结果报告如下。离心5min，弃去上清液，加入磷酸盐缓冲液(PBS)4ml，在1材料与方法混合器上使试管底部的细胞与PBS溶液混匀，再3000r／m1．1实验动物、设备与试剂3O只SPF级实验白鸭(本校动离心5min，最后加入PBS0．5mL溶液，混匀，直接上流式物实验中心提供)，平均体质

6、量(2．0±0．3)kg，4～6月龄。鸭乙细胞仪检测。型肝炎I型病毒血清、抗鸭淋巴细胞亚群单克隆抗体、检测1．4统计学处理应用SPSS18．0统计软件，计量资料以乙型肝炎病毒血清指标试剂盒和检测DHBsAg试剂盒(广东(牙虹)表示，两组间比较采用双侧组间或配对t检验，P<0．05健客医药有限公司)。流式细胞仪(FACSCantoII，美国BD为差异有统计学意义。公司)；AMS一300型自动生化分析仪(北京奥普森公司)。2结果1．2鸭肝炎模型制备取l5只实验鸭，经颈静脉注射鸭乙2．1模型制备情况在注射病毒血

7、清7日后，15只实验鸭血型肝炎I型病毒血清100ms／只，次，连续7日后，取实验鸭清HBsAg、鸭HBeAg和抗一鸭HBc均阳性，说明感染成功。外周血1ml，采用ELISA法检测血清鸭HBsAg、鸭HBeAg感染组动物肝功能损害明显，血清ALT、AST水平急剧升高，和抗一鸭HBctq。与健康对照组比，差异显著(P<0．01，表1)。2．2外周血CD4CF和CD8q"细胞数比较见表2。3讨论基金项目：齐齐哈尔医学院第十二批大学生课外科研课题HBV和DHBV均为嗜肝DNA病毒，它们都有相似的基(2014053

8、)因组和病毒结构特征，均具有通过RNA逆转录复制的特性。作者单位：161006黑龙江省齐齐哈尔市齐齐哈尔医学院临DHBV感染鸭模型是研究HBV基因突变、细胞表面病毒受床医学专业(聂云天)；病原微生物学教研室(刘伯阳)；免疫学教研体、病毒清除机制以及筛选新的抗病毒药物的合适动物模室(王琪)第一作者：聂云天，男，21岁，2012级临床医学专业本科生。型口。DHBV感染成年鸭后血清ALT、AST、总胆红素和凝血酶E-mail：575