杆状病毒SeMNPV Se29基因的克隆、表达与抗体制备.pdf

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1、2011年8月湖南师范大学自然科学学报V0】．34No．4第34卷第4期JournalofNaturalScienceofHunanNormalUniversityAug．，2011杆状病毒基因的克隆、表达与抗体制备李赛男’，李朝飞，庞义，杨凯(1．肇庆学院生命科学学院，中国肇庆526061；2．中山大学有害生物控制与资源利用国家重点实验室，中国广州510275)摘要目的：克隆和表达甜菜夜蛾核多角体病毒(Spodoptemexiguamulticapsidnucleopolyhedrovims，&MN

2、-PV)0R9全长基因(Se29)，制备SE29蛋白的多克隆抗体．方法：用I'CR的方法扩增得到Se29基因，将其克隆至原核表达载体pET-28a(+)上，转化大肠杆菌BL21(DE3)，在IPTG诱导下超量表达了SE29蛋白．采用割胶回收的方法纯化SE29蛋白，以纯化的SE29蛋白作为抗原，免疫新西兰大白兔制备了特异的抗SE29蛋白的抗体．结果：构建了Se29基因原核表达质粒，在大肠杆菌中实现了SE29蛋白的原核表达，获得了SE29蛋白的多克隆抗体，West-enlblot分析表明该抗体能与SeMN

3、PV感染的细胞蛋白样品发生特异性反应．结论：SE29蛋白的多克隆抗体的获得为进一步研究SE29蛋白的功能奠定了基础．关键词甜菜夜蛾核多角体病毒；Se29；克隆；原核表达；抗体中图分类号Q786文献标识码A文章编号1000-2537(201I)04-0078-04CloningandExpressionofSpodopteraexiguaMulticapsidNucleopolyhedrovirusSe29GeneinEscherichia．colandPreparationofAntibodyL／Sa

4、i．12~tlZ·，LIZhao-fei，PANGYi，YANGKai(1．BiologyDepartment，ZhaoqingUniversity，Zhaoqlng526061，China；2．StateKeyLaboratoryofBioeontrol，SunYat-senUniversity，Guangzhou510631，China)AbstractObjective：Tocloneandexpress如mexiguamultieapsidnucleopolyhedrovirus(SeMNPV

5、)Se29gene，andtoprepareitsantibodyforfurtherfunctionanalysisofSe29gene．Methods：Se29genewasobtainedbyPCRmethodfromSeMNPVgenomicDNA．ThePCRproductwasclonedintotheexpressionvectorpET-28a(+)andtransformedintoEscherichiacoliBL21(DE3)，andSE29proteinwasexpressed

6、aftertheinduedonwithIPTG(Isopropylthio-fl—D—galactoside)．TheSE29proteinWiltsseparatedonSDS—PAGEandrecoveredbygelex-traction．NewZealandwhiterabbitsweI．eimmunizedwiththepurifiedproteintoharvestpolyclonalantibodies．Re—sults：TheexpressionplasmidofSe29genewa

7、sconstructedandexpressedsuccessfullyinEcoli．anditspolyclonalantibodywasobtainedfromtherabbit．WesternblottinganalysisindicatedthattheantibodycouldreactwiththecorrespondingproteinexistedinSeMNPV—infectedSe301cells．Conclusion：SE29一specificantibodyissuitabl

8、etobeusedforfurtheranalysisofSE29protein．KeywordsSpodoptera眦multicapsidnucleopolyhedrovirus；Se29gene；cloning；prokaryoticexpres-sion；antibody‘甜菜夜蛾核多角体病毒(Spodopteraexiguamuhicapsidnucleopolyhedrovirus，SeMNPV)属于昆虫杆状病毒收稿13期：2011J04．1