地黄饮子含药血清对胎鼠海马神经干细胞迁移的影响.pdf

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1、中医药学报2015年2月第43卷第1期·8·ActaChineseMedicineandPharmacologyVo1．43，No．1，Feb．2015地黄饮子含药血清对胎鼠海马神经干细胞迁移的影响王倩，范文涛，贺又舜(1．湖南中医药大学，湖南长沙410208；2．陕西中医学院，陕西咸阳712046)摘要：目的：探讨地黄饮子对胎鼠海马神经干细胞迁移的影响。方法：实验采用出生l5天的胎鼠，断头后取出脑组织，使用单克隆方法及限稀释法培养神经干细胞，分为治疗组、模型组、空白组。观察地黄饮子含药血清对神经干细胞迁移的影响。结果：地黄饮子含药血清

2、能促进大鼠海马神经干细胞克隆计数，促进神经干细胞迁移数及迁移率，促进神经干细胞迁移至缺血区，分化为神经元。结论：地黄饮子能够调控SDF一1／CXCR4信号通路促进内源性神经干细胞的移行，为中药促内源性神经再生提供新的研究思路。关键词：地黄饮子；含药血清；神经干细胞迁移中图分类号：R285．5文献标识码：A文章编号：1002—2392(2015)01—0008—03脑缺血后神经细胞损伤，刺激大脑皮层及海马区根据2010年版《中国药典》选择中药材饮片：药神经干细胞增值，但因抑制神经生长因子的作用及损材饮片购买于陕西省西安市中药饮片有限责任公

3、司，伤区瘢痕的阻碍，只有极少的一部分神经干细胞能够饮片经陕西中医学院药学院中药鉴定学教研室鉴定为迁移到缺血损伤区，分化为神经元，建立新的神经环道地药材。按组方配伍比例精确称取，加入l2倍重量路，修复神经功能缺损¨-2]。如何促进神经干细胞的的自来水，先泡40min，再大火煎煮10min，小火煎煮迁移成为新的研究靶点。前期研究发现地黄饮子能有30min，留取药液；再次加入12倍重量的自来水，再大效促进神经功能的恢复，是否能通过促进神经干细胞火煎煮lOmin，小火煎煮30min，留取药液；然后将2次迁移而促进神经再生?本文通过实验研究进一步

4、探讨所取药液混合，装入容量瓶成为地黄饮子煎剂。在旋地黄饮子促神经再生的作用机制。转蒸发仪蒸发浓缩后，定容装入玻璃冻干瓶冷凝干燥，1实验材料干燥条件：一55℃，真空度：<10Pa，时间：24h。计算冻1．1动物干粉获得率，最后装人密闭玻璃容器中密封保存。60只雄性Wistar大鼠，体质量270～290g，清洁1．3主要试剂及仪器级。孕14天的SpragueDawley大鼠；购自西安交通大DMEM／F12(1：1)粉、BeaverNano3D细胞培养学医学实验动物中心，动物许可证号：SCXK2012—水凝胶、B27添加剂、碱性成纤维细胞生长

5、因子(bF—003。GF)、表皮生长因子(EGF)、兔抗大鼠巢蛋白(nestin)1．2药物抗体、小鼠抗大鼠BrdU抗体、羊抗小鼠FITC荧光二中药地黄饮子以《黄帝素问·宣明论方》所载地黄抗。CFM一500E倒置荧光显微镜、CO培养箱、CO饮子药昧和比例配制：熟地黄12g，巴戟天15g，山茱萸振荡培养箱、倒置显微镜、超净工作台、台式离心机、酶15g，石斛15g，肉苁蓉15g，五味子10g，官桂lOg，炮附子标仪、一次性培养板、培养瓶。15g(先煎)，白茯苓12g，麦门冬15g，菖蒲12g，远志10g。2实验方法2．1局灶性脑缺血动物模型

6、复制采用大脑中动脉线栓法复制脑缺血模型。栓塞线收稿日期：2014—07—15修回日期：2014—08—26的制备：采用2．5号的钓鱼线，直径约2．0—2．5mm，基金项目：国家自然科学基金项目(No．81470188)；陕西省科技厅资助剪成4cm长，一端用砂纸打磨成半球形，用记号笔分项目(2012k19—05—04)作者简介：王倩(1978一)，女，博士研究生，副教授，主要从事方剂配伍别在距打磨端0．6cm、1．9em、2．2cm处标记，以利于在研究。手术中判断线栓插入的深度。2015年2月第43卷第1期中医药学报Vo1．43，No．1

7、，Feb．2015ActaChineseMedicineandPharmacology·9·首先，采用10％水合氯醛，0．21mL／100g体质量，模型组细胞培养给予等量0．01mol／LPBS条件培养腹腔注射麻醉大鼠。大鼠完全麻醉后，固定于手术台液；空白组细胞给予正常细胞培养。各组培养液均于上，在大鼠颈部行正中切口，分离颈部皮肤，暴漏气管，低糖培养损伤2h后再加入，培养液浓度为15％，分别在气管右侧逐层分离组织，找到并分离出总动脉进行5次实验。(CCA)、颈外动脉(ECA)、颈内动脉(ICA)、枕动脉。2．6细胞克隆计数先结扎枕动脉，

8、然后分离出颈内动脉。在颈外动脉下各组细胞经低糖损伤2h后放人温度为37℃，含穿2根线，一根离颈总动脉的分叉处约3mm处打结，有5％CO培养箱中进行培养，时间为24h。收集所有另一根用作牵拉。用动脉夹分别挟闭