凯氏定氮实验操作步骤.doc

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1、一、工作原理ATN-300型全自动定氮仪检测原理为：消化取样计算滴定蒸馏整套装置，由电加热消化器、全自动蒸馏器两部分组成。要提高蛋白质含量测定的检测速度，其关键是要加速样品消化煮解的时间，ATN-300型全自动定氮仪消化装置采用井式电加热炉，增大了消化管受热面，使消化管连同管内所注入的10mlH2SO4及试样置入消化管插入井式炉内加热取得更佳的热效应，在消化前置入硒片作为催化剂进一步加速消化煮解，大大缩短消化时间。消化管内溢出的SO2等有害气体，通过消化管上的排污管经抽吸泵由水带入下水道，有效的抑制有害气体的外

2、逸，由省略了实验室中安装毒气通风橱，试样经40分钟左右消化煮解，即可完全消化。消化的过程主要反应如下：R·C·H·NH2·COOH+H2SO4→CO2+SO2+NH3+H2O2NH3+H2SO4→(NH4)2SO4蒸馏与吸收过程的主要反应如下：(NH4)2SO4+2NaOH→Na2SO4+2NH3+2H2ONH3+4H3BO3→NH4HB3O7+5H2O然后经滴定，计算蛋白质含量，滴定的过程是盐酸和硼酸氢铵反映的过程。NH4HB3O7+HCl+5H2O→NH4Cl+4H3BO3一、技术参数1．测定品种：粮食、食

3、品、饲料、酿造、土壤、制糖、乳制品、药物等物质2．测定样品量：固体＜5g/个，液体＜15ml/个3．测定范围：含氮量0.1~200mg(0.02%~95%)4．测定数量：消化：一次同时消化个数按炉孔数定；单个蒸馏5．测定时间：消化每批45min；蒸馏每个6min6．测定重现性：平行试验结果符合GB/T6423-947．电源：220V，50Hz二、使用说明1．其他仪器和用具1．1分析天平：感量0.0001g1．2实验室用粉碎机或研钵1．3酸式滴定管：25ml或10ml1．4锥形瓶：容积250ml1．5分样筛：孔径

4、0.45mm(40目)2．试剂2.1盐酸(HCl)：分析纯(GB622)0.05mol/L标准液，(4.2ml盐酸，注入1000ml蒸馏水)碳酸钠法标定盐酸。2.2氢氧化钠(NaOH)：化学纯或工业纯(GB629)、40g溶于蒸馏水中溶成100ml，配成40%水溶液(m/v)。2.3硼酸(H3BO3)：分析纯(GB628)2g，溶于蒸馏水中配成100ml2%水溶液(m/v).2.4混合指示剂：甲基红(G5H15N3O2)(HG3-958)溶于乙醇配成0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿(HG3-1220)溶于乙醇配成0.

5、5%乙醇溶液，二种溶液等体积混合，阴凉处保存(保存期三个月以内)。2.5硫酸铜(CuSO4·5H2O)分析纯(GB655)10g；硫酸钾(K2SO4)(HG3-920)分析纯150g，在研钵中研磨，仔细混匀后过40目筛(加速剂)。2.6浓硫酸(H2SO4)化学纯(GB625)(含量98%、无氮)。3．操作方法3.1样品消化（1）磨样：磨样机磨样，时间控制在10s左右，以样品粉碎不出油为佳。称取1g无损的倒入洗净的消化管中。（2）称取6gK2SO4和0.2g5H2O·CuSO4、0.006g硒粉一同倒入研钵中，研

6、磨成细末，不得偷懒。研磨完毕后倒入消化管中。将消化管分别放入消化架各个孔内，用5ml移液器小心的在每管中滴加15ml浓硫酸，此步一定小心操作!！然后置于消化炉上，开启抽气三通上连接的自来水龙头，使抽气三通处于吸气状态。接通电源，在加热初始阶段需注意观测，防止试样因急沸而飞溅。(经验值初始温度100℃30min，禁止起始温度超过120℃，然后升高温度到200℃20min，最后升温到400℃。)消化结束后（消化液呈澄清透明状），消化液澄清透明后再继续加热30min。关闭消化炉，将消化管架移至冷却架冷却至40-50度

7、左右。然后进行下一步的蒸馏。3．2蒸馏（1）酸碱配置方法见上文。配置酸碱，尤其是配NaOH溶液时切记在大量水中少量的缓慢的加入NaOH，以防散热过大，烫伤手指。边倒边搅拌。由于国产NaOH不纯，可能会散发大量刺鼻气味，请注意通风，最好在万相通风罩下进行。（2）凯氏定氮仪上已标明酸碱进管，请对应插入酸碱桶中液面以下。用配套橡胶管根据结构图和仪器侧面标签提示连好管路。（3）必须按住启动键打开侧面电源开关。将消化管置于左侧，锥形瓶置于右侧。此步已设定好，无需操作（各参数数值设定）按启动键，测定酸泵、水泵、碱泵的流量参

8、数，按下一项键，在右边托盘上接收瓶，接着按加酸按键，液晶屏上显示4秒左右时，再按此键就关闭了酸泵，此时取下接收瓶倒掉液体（主要是防止管路中空气导致加液不准），接着重复上面加液工作，停止后，取下接收瓶用量筒量出数值，计算出每秒加酸的量，在自动加液时只要输入时间就可知道加了多少液体量（根据实验需要量设定），加碱、加蒸馏水在左边放上消化管，加量及计算的方法同上。液晶屏提示：设定加酸时间（毫秒