白甲鱼不同组织同工酶的组织特异性研究.doc

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1、白甲鱼不同组织同工酶的组织特异性研究　　摘要：采用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳，对白甲鱼的脑、眼、心脏、肝脏、肾脏和肌肉６种组织的乳酸脱氢酶、酯酶和苹果酸脱氢酶３种同工酶进行了初步研究。结果表明，不同组织中３种同工酶均存在比较明显的组织特异性。Ｌｄｈ－ＡＢ３和Ｌｄｈ－Ｂ４在脑、眼、心脏和肾脏４种组织中均优势表达，Ｌｄｈ－Ａ４和Ｌｄｈ－Ａ３Ｂ在肾脏和肌肉中优势表达；ＥＳＴ同工酶在肝脏中酶带条数最多且活性最强，在眼和肌肉中活性最弱；ＭＤＨ同工酶在肝脏和肾脏中只存在上清液型，但活性较强。　　关键词：白甲鱼；同工酶；组织特异性　　中图分类号：Ｑ９５９．４６＋８；Ｑ５５文献标识码：Ａ

2、文章编号：0439－８11423－4912-04　　　　ＳｔｕｄｙｏｎＩｓｏｚｙｍｉｃＴｉｓｓｕｅＳｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙｏｆＤｉｆｆｅｒｅｎｔＴｉｓｓｕｅｓｉｎＯｎｙｃｈｏｓｔｏｍａｓｉｍａ　　　　ＷＡＮＧＨｏｎｇ－ｙｅ１，２，ＺＨＡＮＧＪｕａｎ１，２，ＣＡＩＹａｎ－ｚｈｉ２，ＬＵＴａｏ３，ＱＩＮＸｉａｏ－ｙａｎ３　　　　　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｈｅｉｓｏｚｙｍｉｃｐａｔｔｅｒｎｓｏｆＬＤＨ，ＥＳＴａｎｄＭＤＨｉｎ6ｔｉｓｓｕｅｓｏｆＯｎｙｃｈｏｓｔｏｍａｓｉｍａｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｖｅｒｔｉｃａｌｐｏlｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉ

3、ｓ.Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｉｓｏｚｙｍｉｃｐａｔｔｅｒｎｓｏｆｔｈｅｓｅ3ｅｎｚｙｍｅｓｈａｄｄｉｓｔｉｎｃｔｔｉｓｓｕｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｉｎｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｉｓｓｕｅｓ.Ｌｄｈ－Ｂ４ａｎｄＬｄｈ－ＡＢ３ｉｓｏｚｙｍｉｃｂａｎｄｓｗｅｒｅｄｏｍｉｎａｎｔｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎｔｈｅｏｔｈｅｒ4ｔｉｓｓｕｅｓｉｎｃｌｕｄｉｎｇｔｈｅｂｒａｉｎ，ｅｙｅs，ｈｅａｒｔａｎｄｋｉｄｎｅｙ．ＴｈｅＬｄｈ－Ａ４ａｎｄＬｄｈ－Ａ３Ｂｉｓｏｚｙｍｉｃｂａｎｄｓｗｅｒｅｄｏｍｉｎａｎｔｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎｔｈｅｋｉｄｎｅｙａ

4、ｎｄｍｕｓｃｌｅ；TｈｅｍｏｓｔｎｕｍｂｅｒｏｆＥＳＴｉｓｏｚｙｍｉｃｂａｎｄｓｗａｓａｐｐｅａｒｅｄｉｎｔｈｅｌｉｖｅｒａｎｄｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｗａｓｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔ，ｔｈｅｌｏｗｅｓｔａｃｔｉｖｉｔｙｗａｓａｐｐｅａｒｅｄｉｎｂｏｔｈｏｆｔｈｅｅｙｅｓａｎｄｍｕｓｃｌｅ；Oｎｌｙｓ－ＭＤＨｗａｓｆｏｕｎｄｉｎｔｈｅｌｉｖｅｒａｎｄｋｉｄｎｅｙ，ａｎｄｉｔｓａｃｔｉｖｉｔｉｅｓweｒｅｒｅｌａｔｉｖｅｈｉｇｈ.　　Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｏｎｙｃｈｏｓｔｏｍａｓｉｍａ；ｉｓｏｚｙｍｅ；ｔｉｓｓｕｅｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ　　同工酶是一组能够催化同一种生化反应但分子一级结

5、构不同的酶，是基因表达的产物。同一物种的不同个体或同一个体的不同组织以及生物的不同发育阶段、不同代谢条件下都有同工酶分布［１，２］。鱼类同工酶的遗传学研究开始于２０世纪６０年代初期，现已证明硬骨鱼类的同工酶系统具有明显的组织特异性［３，４］。同工酶作为一种生化遗传指标，广泛地用于鱼类物种鉴定、种群遗传多样性分析、系统发育及生化遗传等各个方面［５］。　　白甲鱼［Ｏｎｙｃｈｏｓｔｏｍａｓｉｍａ］，地方名白甲、突吻鱼、毛白甲，隶属鲤形目鲤科�亚科白甲鱼属，主要分布于长江水系的干流及支流，具有半洄游习性，属底栖鱼类，为长江流域土著名优经济鱼类之一［６］，其肉质细嫩、味道鲜美、营养

6、丰富，颇受消费者的喜爱［７］。目前，有关白甲鱼生化遗传方面的研究较少，主要集中于生物学特性及繁育养殖技术等方面，而关于其同工酶表达方面的研究尚未见报道。本研究采用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳，对白甲鱼６种组织中的乳酸脱氢酶、酯酶和苹果酸脱氢酶３种同工酶进行了电泳分析，旨在为进一步研究白甲鱼的遗传特性、种质鉴别及生物进化等方面提供一定的理论依据，并为其人工选种和定向育种提供生化遗传学指标。　　１材料与方法　　１．１材料　　１．１．１实验鱼实验用白甲鱼来源于嘉陵江、沱江以及人工饲养的鱼种，选择符合白甲鱼生物学性状、体格健壮、体表无伤的大规格鱼种共９０尾，平均体长ｃｍ，平均体重ｇ

7、。　　１．１．２仪器与试剂玻璃研磨器；ＹＰ２０２Ｎ型电子天平；ＦＡ２００４型电子天平；ＧＬ２０－Ｂ型高速冷冻离心机；ＤＹＹ－１０Ｃ型稳压稳流电泳仪；－２０℃低温冰箱；ＬＲＨ－２５０－Ｚ型生化培养箱等。　　３０％丙烯酰胺；Ｎ，Ｎ′―甲叉双丙烯酰胺；过硫酸铵；四甲基乙二胺；三羟甲基氨基甲烷等。　　１．２方法　　１．２．１样品制备首先将活鱼鳃弓基部剪断于水中放血，置于冰上解剖，取出脑、眼、心脏、肝脏、肾脏和肌肉６种组织，用冰冻无菌蒸馏水冲洗以除去组织血污，然后用滤纸轻轻吸去多余水分。分别取上述６种组织称重后，按１∶３的比例加入０．１