云斑尖塘鳢不同组织同工酶的研究.doc

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1、云斑尖塘鳢不同组织同工酶的研究　　摘要：采用垂直板状聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳技术对云斑尖塘鳢的鳍、鳃、肌肉、肝脏、眼睛、心脏、脾脏和性腺８种组织中的４种同工酶进行了研究，并对其同工酶位点及其酶谱表型进行了分析。结果表明，云斑尖塘鳢４种同工酶系统具有不同程度的组织特异性。ＥＳＴ由４个基因位点编码；ＬＤＨ酶带多于典型的５条，并且眼睛中存在ＬＤＨ－Ｃ４；ＳＯＤ同工酶酶带丰富，共检测到１４条酶带；ＭＤＨ具有上清液型和线粒体型两种类型。　　关键词：云斑尖塘鳢；同工酶；组织特异性；遗传基础　　中图分类号：Ｑ９５９．４８３；Ｑ５５文献标识码：Ａ文章编号：0439－８11401－0136-04　　　　I

2、nvestigationonIsozymesinDifferentTissuesof0xyeleotrismarmoratusBleeker　　　　ＷＵＳｈａｏ－ｗｅｉ，ＺＨＡNGＹｉ－ｓｈｕｎ，ＬＩＺｕ－ｆｕ　　　　　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｆｏｕｒｉｓｏｚｙｍｅｓｆｒｏｍｅｉｇｈｔｔｉｓｓｕｅｓｏｆ０ｘｙｅｌｅｏｔｒｉｓｍａｒｍｏｒａｔｕｓＢｌｅｅｋｅｒｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄｂｙｖｅｒｔｉｃａｌｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅｇｒａｄｉｅｎｔｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｓｅｆｏｕｒｉｓｏｚｙｍｅｓｈａｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｅｇｒｅｅ

3、ｓｏｆｔｉｓｓｕｅｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ．ＥＳＴｗａｓｅｎｃｏｄｅｄｂｙｆｏｕｒｌｏｃｉ；ＬＤＨｅｎｚｙｍａｔｉｃｈａｄｍｏｒｅｔｈａｎｔｙｐｉｃａｌ５ｂａｎｄｓｏｆｔｅｌｅｏｓｔ，ａｎｄＬＤＨ－Ｃ４ｗａｓｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｉｎｅｙｅ；ＳＯＤｂａｎｄｓｅｎｃｏｄｅｄｂｙ３ｌｏｃｉｗｅｒｅｒｉｃｈas１４ｂａｎｄｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｉｎａｌｌｅｉｇｈｔｔｉｓｓｕｅｓ；ｔｗｏｔｙｐｅｓｏｆＭＤＨ，ｍ－ＭＤＨａｎｄｓ－ＭＤＨ，ｗｅｒｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ．　　Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＯｘｙｅｌｅｏｔｒｉｓｍａｒｍｏｒａｔｕｓＢｌｅｅｋｅｒ；ｉｓｏｚｙｍｅ；ｔｉｓｓｕｅｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ

4、；hereditarybasis　　　　云斑尖塘鳢在分类上属于鲈形目、虾虎鱼亚目、塘鳢科，又称泰国笋壳鱼、条纹虾虎鱼，主要分布于东南亚湄公河水系，包括柬埔寨、老挝、缅甸、泰国和越南。因其肉质鲜美，在一些亚洲国家被视为珍馐佳肴，具有很高的经济价值。目前，我国对云斑尖塘鳢的研究主要集中在养殖技术、人工育苗和病害防治等方面［１－３］，而有关云斑尖塘鳢种质资源与遗传多样性方面的研究仅见范小勇等［４］对云斑尖塘鳢、线纹尖塘鳢及其杂交子一代的遗传关系的研究。采用聚丙烯酰胺垂直板梯度凝胶电泳对云斑尖塘鳢的８种组织的４种同工酶进行研究，探讨其同工酶系统的遗传基础，可为云斑尖塘鳢的遗传多样性分析和品种改

5、良提供有价值的生化遗传指标。　　１材料与方法　　云斑尖塘鳢采自广东省顺德市，体长１８～２８ｃｍ，体重３７０～４３０ｇ。活体带回实验室后，立即解剖，取鳍、鳃、肌肉、肝脏、眼睛、心脏、脾脏和性腺８种组织用磷酸缓冲液冲洗干净，以样品∶缓冲液＝１∶３加入预冷的匀浆缓冲液，在冰浴下匀浆。匀浆液在４℃条件下，１５０００ｒ／ｍｉｎ离心３０ｍｉｎ，将上清液按所需量装小管中置于－８０℃冰箱中备用。此试验采用聚丙烯酰胺垂直梯度凝胶电泳法。采用３．５％的浓缩胶，７．５％的分离胶，电泳缓冲液使用Ｔｒｉｓ－Ｇｌｙ缓冲液，ｐＨ值为８．３，电泳均在４℃冰箱中进行。染色方法参考《同工酶技术及其应用》、《电泳》、《蛋白

6、质电泳实验技术》和朱蓝菲的鱼类同工酶和蛋白质的聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳法［５－８］。酶带的命名按向阳极泳动快慢顺序依次编号。　　２结果与分析　　２．１酯酶［ＥＳＴ］　　酯酶在云斑尖塘鳢各组织中共检测出９条带，其中肝脏具有全部９条酶带并且酶的活性明显高于其他组织，眼睛、鳍、性腺中酶的活性次之，肌肉中酶的活性最弱。酶带的组织特异性主要体现在肌肉与其他组织的差异。除了肌肉以外，其他７种组织都具有ＥＳＴ－１到ＥＳＴ－３这３条酶带。ＥＳＴ－２在肝脏中的活性明显高于其他组织。ＥＳＴ－５、ＥＳＴ－６、ＥＳＴ－７和ＥＳＴ－８这４条酶带比较细且ＥＳＴ－５与ＥＳＴ－６、ＥＳＴ－７与ＥＳＴ－８之间间距非常小，

7、这４条酶带是肝脏中特有的。ＥＳＴ－９只存在于肌肉和肝脏中，同时也是肌肉中惟一存在的酶带。　　２．２乳酸脱氢酶［ＬＤＨ］　　云斑尖塘鳢各组织中检测到的乳酸脱氢酶酶带数量比较多，共１２条。眼睛中酶带数量最多，有９条；肝脏中酶带数量最少，只有一条ＬＤＨ－５。ＬＤＨ－５在所有８种组织中都存在并且是各组织中活性最高的一条酶带。ＬＤＨ－１、ＬＤＨ－２、ＬＤＨ－３、ＬＤＨ－４这４条酶带仅在眼组织中存在，ＬＤＨ－８仅在肌肉组织中存在。　　２．３苹果酸脱氢酶［Ｍ