合浦珠母贝C型凝集素2的序列特征和表达分析.doc

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1、合浦珠母贝C型凝集素2的序列特征和表达分析　　摘要：构建了合浦珠母贝的ｃＤＮＡ文库，并通过ＥＳＴ序列筛选和重新测序获得了一个新的Ｃ型凝集素基因的ｃＤＮＡ序列，命名为ＰｏＬＥＣ２，其长度为１６５９ｂｐ，５’端非编码区为３９ｂｐ，３’端非编码区为４５ｂｐ，开放阅读框为１５７５ｂｐ，可编码５２4个氨基酸；ＰｏＬＥＣ２蛋白的分子量约５８．０ｋＤ，等电点为５．２；ＰｏＬＥＣ２蛋白包含一个信号肽序列、一个ＭＡＭ－２结构域和一个Ｃ型凝集素的糖识别结构域。同源性分析结果表明，ＰｏＬＥＣ２与其他物种Ｃ型凝集素的糖识别结构域序列的同源性在２６．５％～３３

2、．６％，相似性在４５．１％～５５．６％。组织表达分析表明，ＰｏＬＥＣ２基因在肝胰脏、鳃、外套膜、性腺及肠组织中均有表达，经溶藻弧菌刺激后８ｈ在肠组织中的表达量显著上调。　　关键词：合浦珠母贝；Ｃ型凝集素；序列特征；表达分析　　中图分类号：Ｓ９１７．４文献标识码：Ａ文章编号：0439－８11419－4026-05　　　　ＳｅｑｕｅｎｃｅａｎｄＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＡｎａｌｙｓｉｓｏｆａＮｏｖｅｌＣ－ｔｙｐｅＬｅｃｔｉｎＧｅｎｅｆｒｏｍＰｅａｒｌＯｙｓｔｅｒＰｉｎｃｔａｄａfucata　　　　ＨＵＹｕ－ｔｉｎｇ１，２，ＺＨＡＮＧＤｉａｎ－ｃ

3、ｈａｎｇ１，ＪＩＡＮＧＳｈｉ－ｇｕｉ１，ＳＵＴｉａｎ－ｆｅｎｇ１，ＣＵＩＳｈｕ－ｇｅ１，３，ＧＵＯＨｕａ－ｙａｎｇ１，２，ＣＨＥＮＭｉｎｇ－ｑｉａｎｇ１　　　　　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｈｅｃＤＮＡｌｉｂｒａｒｙｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｐｅａｒｌｏｙｓｔｅｒ．ＡＣ－ｔｙｐｅｌｅｃｔｉｎｇｅｎｅ，ｎａｍｅｄａｓＰｏＬＥＣ２，ｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄｂｙｓｃｒｅｅｎｉｎｇａｎｄｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇusingＥＳＴｓｅｑｕｅｎｃｅｓ．ＴｈｅｌｅｎｇｔｈｏｆＰｏＬＥＣ２ｃＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｅｗａｓ１６５９ｂｐ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅ

4、ａｎａｌｙｓｉｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅｏｆＰｏＬＥＣ２ｇｅｎｅｗａｓ１５７５ｂｐ．Ｔｈｅ５’-ＵＴＲｌｅｎｇｔｈｗａｓ３９ｂｐａｎｄ３’-ＵＴＲｌｅｎｇｔｈｗａｓ４５ｂｐ．ＴｈｅＰｏＬＥＣ２ｇｅｎｅｅｎｃｏｄｅｄａｐｒｏｔｅｉｎｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ５２4ａｍｉｎｏａｃｉｄｓ，ａｎｄｔｈｅｐｒｅｄｉｃｔｅｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔｏｆＰｏＬＥＣ２ｐｒｏｔｅｉｎｗａｓａｂｏｕｔ５８．０ｋＤｗｉｔｈｔｈｅｉｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃｐｏｉｎｔｏｆ５．２．ＴｈｅｐｒｏｔｅｉｎｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆＰｏＬＥＣ２

5、ｇｅｎｅｃｏｎｔａｉｎｅｄａｓｉｇｎａｌｐｅｐｔｉｄｅｓｅｑｕｅｎｃｅｗｉｔｈ１６ａｍｉｎｏａｃｉｄｓ，ａＭＡＭ－２ｄｏｍａｉｎａｎｄａｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎｄｏｍａｉｎｏｆＣ－ｔｙｐｅｌｅｃｔｉｎ．ＳｅｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｉｄｅｎｔｉｔｙａｎｄｓｉｍｉｌａｒｉｔｙｏｆｔｈｅｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎｄｏｍａｉｎｏｆＰｏＬＥＣ２ｇｅｎｅｓｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅＰ．fucataａｎｄｏｔｈｅｒｏｒｇａｎｉｓｍｓwere２６．５％~３３．６％ａｎｄ４５．１％~５５

6、．６％ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＴｉｓｓｕｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅＰｏＬＥＣ２ｇｅｎｅｗａｓｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎａｌｌｔｉｓｓｕｅsｏｆＰ．fucata，ａｎｄｔｈｅｒｅｗａｓｍａｘｉｍｕｍｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｔｈｅｉｎｔｅｓｔｉｎｅａｆｔｅｒ８ｈｏｕｒｓｏｆｔｈｅｂａｃｔｅｒｉａｌｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．　　Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｐｉｎｃｔａｄａfucata；Ｃ－ｔｙｐｅｌｅｃｔｉｎ；ｓｅｑｕｅｎｃｅｆｅａｔｕｒｅｓ；ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎａｌｙｓｉｓ　　　　Ｃ型凝集素为一类钙离子依赖活性的糖

7、蛋白，具有至少一个糖识别结构域，能够识别和结合细胞膜表面的糖基，其结合糖基具有专一性，即一种凝集素只能结合一种糖基［１，２］。Ｃ型凝集素是一种模式识别受体蛋白，主要有Ｍａｎ型配体和Ｇａｌ型配体，Man型配体与Ｄ－甘露糖、Ｄ－葡萄糖结合，Gal型配体与Ｄ－半乳糖及其衍生物结合［２］。ＰＲＲ蛋白能识别病原微生物引起宿主的免疫应答，在无脊椎动物免疫防御中发挥着重要作用［１，２］。　　合浦珠母贝又称马氏珠母贝，是我国海水珍珠的主要种类，由其所产的珍珠即为举世闻名的“南珠”。近年来，由于养殖技术落后、养殖环境污染和种质退化，致使养殖合浦珠母贝出

8、现了生长缓慢、病害频发及死亡率高等现象［３］，严重影响了合浦珠母贝养殖业的发展。因此，必须加强合浦珠母贝免疫防御分子机制的研究，为其免疫防治策略的制定提供理论依据。目前在栉孔扇贝、海湾扇贝及长牡蛎等［４－８］软体动物中初