沉默癌胚抗原相关细胞黏附分子1基因抑制SHG44人胶质瘤细胞增殖并促进其凋亡.pdf

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1、细胞与分子免疫学杂志(ChinJCellMolImmuno1)2015，31(123·论著·文章编号：1007—8738(2015)01—0023—04沉默癌胚抗原相关细胞黏附分子1基因抑制SHG44人胶质瘤细胞增殖并促进其凋亡许刚柱'，李文，张鹏，丁志斌，赵慧，张俊锋，王茂德(西安交通大学医学院第一附属医院神经外科，陕西西安710061；西安医学院第一附属医院神经外科，陕西西安710077；西安医学院临床医学院外科学教研室，陕西西安710021)[摘要】目的采用RNA干扰技术(RNAi)沉默癌胚抗原相关细胞黏附分子1(CEACAM1)基因的表达，观察沉默效果及沉默

2、CEACAM1表达后对SHG44人胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法设计并化学合成针对CEACAM1的3对小干扰RNA(siRNA)，脂质体法瞬时转染SHG44细胞。流式细胞术(FCM)检测转染效率，采用实时定量PCR(qRT—PCR)检测siRNA转染前后SHG44细胞中CEACAM1mRNA的表达，Westernblot法检测CEACAM1蛋白的表达。CCK．8法检测SHG44细胞细胞增殖活性，armexinV—FITC／PI染色结合FCM检测SHG44细胞凋亡，Westernblot法检测cleavedcaspase一3和裂解型多聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶(cle

3、avedPARP)的变化。结果CEACAM1siRNA转染效率达85％。与空白对照组和阴性对照组比较，qRT—PCR及Westernblot结果显示，3组特异性siRNA转染48h后，在mRNA和蛋白水平上CEACAM1的表达均降低，以CEACAM1．siRNA3效果最明显。siRNA组SHG44细胞的增殖能力较正常对照组明显下降，凋亡细胞比例增加。沉默CEACAM1表达可以上调cleavedcaspase一3和cleavedPARP的表达。结论沉默CEACAM1基因表达可有效抑制SHG44胶质瘤细胞的增殖，促进细胞凋亡。[关键词]癌胚抗原相关细胞黏附分子1(CEA

4、CAM1)；胶质瘤；RNA干扰；增殖；凋亡[中图分类号]R730．264，R392—33[文献标志码】ASilencingofcarcinoembryonicantigen·relatedcelladhesionmolecule1inhibitsproliferationandinducesapoptosisinhumangliomaSHG44cellsxuGangzhu’，LIWen，ZHANGPeng，DINGZhibin，ZHAOHui，ZHANGJunfeng，WANGMaodeDepartmentofNeurosurgery，FirstAfiliatedH

5、ospital，MedicalCollegeofXi’anJiaotongUniversity，Xi’an710061；DepartmentofNeumsurgery，FirstAffiliatedHospital，Xi’anMedicalUniversity，Xi’an710077；DepartmentofSurgery，ClinicalMedicalCollege，Xi’anMedicalUniversity，Xi’an710021，ChinaIAbstractlObjective3-oinvastigatetheefectofsiRNA．inducedsile

6、ncingofcarcinoembryonicantigen-relatedcelladhesionmolecule1(CE：．AM1)0nproliferationandapoptosisinhumangliomaSHG44cells．MethodsThreepairsofspecificsiRNAtargetingCEACAM1weredesignedandsynthesized．andthentransientlytransfectedintoSHG44celsviacationicIiposometransfectionmethod．Transfection

7、eficiencywasexaminedbyflowcytometry(FCM)．Real-timequantitativePCR(qRT-PCR)andWeaternblottingwererespectivelyusedtodetectCEACAM1expressionatmRNAandproteinlevels．andtheproliferationabilityandapoptosisofSHG44cellsaftertransfectionwereassessedbvCCK-8assayandFCMjncombinationwithannexinV-F