茶多酚二甲基亚砜合剂对卷烟烟气遗传毒性的防护作用.pdf

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1、中国烟草学报ActaTabacariaSinicahttp：／／ycxb．tobacco．org．cn100Doi：10．3969／j．issn．1004-5708．2014．160吸烟与健康茶多酚二甲基亚砜合剂对卷烟烟气遗传毒性的防护作用黄波，龙颖，李东阳南华大学公共卫生学院，湖南省衡阳南华大学42l001摘要：目的研究卷烟烟气所致人支气管上皮细胞DNA损伤以及茶多酚二甲基亚砜合剂的保护作用，为卷烟烟气对机体损伤的防护提供理论及实验依据。方法将细胞分为5组：空白组、卷烟烟气组、茶多酚保护组、二甲基亚砜

2、保护组、茶多酚二甲基亚砜合剂保护组；通过检测微核和多核细胞观察染色体损伤，彗星实验及H2AX蛋白磷酸化检测DNA的损伤，多核细胞法检测细胞HPRT突变。结果BEAS．2B细胞经卷烟烟气染毒后，细胞的微核率、多核率、拖尾率升高，H2AX蛋白磷酸化表达增高，HPRT突变率增高，差异均有统计学意义(P<0．05)，茶多酚保护组、二甲基亚砜保护组能降低卷烟烟气诱发的DNA损伤，合剂保护组的防护作用最好。结论卷烟烟气对BEAS．2B细胞DNA具有损伤作用，茶多酚二甲基亚砜合剂有较强防护作用。关键词：卷烟烟气；茶多

3、酚；二甲基亚砜；DNA损伤；防护作用引用本文：黄波，龙颖，李东阳．茶多酚二甲基亚砜合剂对卷烟烟气遗传毒性的防护作用[J]．中国烟草学报，2015，21(2)研究表明，肺癌的死亡率与烟草的消费呈显著为更好地降低卷烟的危害，本实验通过采用茶正相关】。因此烟草被认为是人类致癌物质，自由基多酚和二甲基亚砜的合剂，采用人支气管上皮细胞系是卷烟烟气中主要的一类有害物质，能导致人体组织(BEAS一2B细胞)作为靶细胞，验证对卷烟烟气抽和细胞的氧化，损害细胞膜上的脂类和蛋白质，引提物所致遗传毒性的防护作用，为控制卷烟烟

4、气危害发细胞病变、癌症等疾病[2-4]o我们在前期的研究中及开发相关新药提供实验依据。发现卷烟烟气抽提物(cigarettesmokecondensates，1材料与方法CSCs)染毒人支气管细胞(humanbronchialepithelialcellsline，BEAS一2B)后，导致细胞产生大量自由基，1．1材料随CSCs染毒剂量而增高，细胞膜破裂，表现为细胞人支气管上皮细胞(BEAS一2B细胞)为军事医外的细胞内酶乳酸脱氢酶增高，细胞的DNA出现断学科学院朱茂祥教授惠赠，以无血清培养基LHC一8

5、裂，微核细胞增多，基因突变率增高，表明卷烟烟气培养，DMSO购自美国SIGMA公司，茶多酚(无锡通过诱发细胞自由基的大量产生，造成细胞的氧化损太阳绿宝科技有限公司)，卷烟烟气抽提物(CSCs)：伤而引起遗传毒性。在采用卷烟烟气染毒时，加入茶将标准参照卷烟(2IF，肯塔基大学，美国)，通多酚(teapolyphenols，TPs)，可使卷烟烟气诱发人支过JJD200型单通道吸烟机(郑州烟草研究院)导入气管上皮细胞产生的自由基(HO和’OH及O’)气泡吸收管中的乙醇和细胞培养基(V／V=1：1)收集降低，细

6、胞氧化损伤降低，能在一定程度减少从卷烟抽提物，配制成1支烟／mL的卷烟烟气抽提物储备烟气的危害。前期的研究中同样发现，二甲基亚砜液，一80℃贮存备用J。(DMSO)对卷烟烟气导致的人支气管上皮细胞遗传物1．2细胞分组及处理质损伤、自由基增多、基因位点突变有较好的防护作处于对数生长期的人支气管上皮细胞分为5组：用。发现DMS0对卷烟烟气作用于BEAS一2B细胞后，对照组(BEAS一2B)、卷烟烟气组(CSCs)、茶多酚保护可引起彗星实验中彗星细胞增多，DNA损伤加重，组(CSCs+TPs)、二甲基亚砜保护

7、组(CSCs+DMSO)、具有一定程度的抑制作用，表明二甲基亚砜、茶多酚茶多酚二甲基亚砜合剂保护组(CSCs+TPs+DMS0)。均能一定程度上降低卷烟烟气的氧化损伤[5-61。卷烟烟气组细胞加入终浓度为0．01支／mL卷烟烟气基金项目：国家自然科学基金资助(No．81272994)作者简介：黄波(1974一)，副教授，博士，研究方向为环境化学致癌及其医学防护，Email：huangb00930@163．com收稿日期：2014．04—16黄波等茶多酚二甲基亚砜合剂对卷烟烟气遗传毒性的防护作用101抽提

8、物；茶多酚保护组加入终浓度为250mg／L茶多膜5分钟；根据NC膜上的蛋白分子量标记将膜分为酚、二甲基亚砜保护组加入终浓度为0．5％二甲基亚两半，一半检测B—actin蛋白，下一部分用于H2AX砜，茶多酚二甲基亚砜合剂保护组加入O．5％二甲基蛋白，将NC膜放入含—actin抗体和H2AX抗体的亚砜+250mg／L茶多酚，3个保护组加入上述保护剂缓冲液中(1：1000)，生化培养箱中保温孵育1h，或后在细胞培养中孵育2h后，再加入终浓度为O．