白细胞介素-10和12在哮喘发病机制中的作用.pdf

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1、-l838·广东医学2015年6月第36卷第l2期GuangdongMedicalJournalJun．2015，Vo1．36，No．12白细胞介素一10和12在哮喘发病机制中的作用王宏丽，郝小惠，王袁。，郭艳丽，刘楠，白玉萍，刘和亮。华北理工大学公共卫生学院，医学实验研究中心，附属医院呼吸内科(河北唐山063000)【摘要】目的探讨白细胞介素(IL)一1O、l2在哮喘发病机制中的作用及两者之间的相关性。方法雄性C57小鼠随机分为对照组、哮喘组，IL—l0、IL一12功能性基因敲除组及IL一1O、IL—l2干预组；除对照组外，每组按采样时间分为不同亚组，每组5只

2、小鼠。小鼠致敏后不同时间段取血液、肺泡灌洗液(BALF)及肺组织，酶联免疫吸附法测定小鼠血清IgE、N0水平及BALE中TNF—Ot、IL一10和IL—l2含量，HE染色观察炎症细胞浸润情况，BAIF细胞沉淀用于细胞总数和EOS分类计数。结果与对照组相比，哮喘组小鼠细胞总数、EOS百分比显著升高，出现明显的气道炎症反应；IL～1O、IL一12功能性基因敲除组症状较哮喘组严重；IL—l0、IL一12干预组与相同时间段的哮喘组相比，TNF—O／．、NO、IgE浓度和白细胞总数，嗜酸性粒细胞百分比明显降低，哮喘保护因子IL一10、IL—l2的浓度明显升高，差异有统计学

3、意义(P<0．01)。结论IL一1O和IL—l2缺乏可导致哮喘发病程度加重，两者在哮喘发病过程中呈正相关关系，利用IL一10和IL一12干预治疗哮喘可明显减轻其发病程度。【关键词】哮喘；白细胞介素一10；白细胞介素一l2；功能性基因敲除哮喘是由嗜酸粒细胞、肥大细胞等多种细胞成分渗透泵抗体浓度为1．4g／mL)。对照组用等量的参与的气道变应性炎症和气道高反应性为特征的疾PBS溶液进行致敏和激发。病。作为一种常见病，近年来其发病率和病死率都有1．2主要试剂与仪器酶标仪(sunrise—basictecan，瑞上升趋势¨。在哮喘发病过程中，白细胞介素(inter-士帝

4、肯公司)；402一AI超声雾化器(江苏鱼跃医疗设备leukin，1L)起着重要的作用。目前国内外对IL的研究有限公司)；自制透明雾化吸入箱(30cmx20emx10表明，人体内不同IL的存在，对哮喘的发病与治愈密cm)；显微镜(日本Nikon公司)；3K30低温高速离心机切相关。其中IL—l0、IL一12是研究的热点之一，(美国Sigma公司)；DNP一9052电热恒温培养箱(上但目前这两种因子在哮喘发病中的具体作用以及相互海精宏实验设备有限公司)。OVA(美国Sigma公司)；问的关系还不十分清楚。2012年6月至2013年6月，氢氧化铝[Al(OH)，天津大

5、茂化学试剂厂]；小鼠IL一本研究拟观察这两种细胞因子对哮喘气道炎症及相互10、IL一12、FNF一仪、IgE、NO酶联免疫试剂盒(美国问的作用影响，探讨其防治哮喘的可能机制，为临床上RB公司)；免疫组织化学试剂盒(北京博奥森公司)；哮喘的预防和控制提供实验依据。重组IL一】0、重组IL一12(美国PEROTECHEC公1材料与方法司)；小鼠微渗透泵(Miniosmoticpump，美国ALIET公1．1实验动物分组及模型的建立健康雄性C57小司)。鼠，6～8周龄，体重18～22g(北京华阜康生物科技股1．3观察指标及检测方法份有限公司，许可证号：CSXK京200

6、9—0004)。随机1．3．1标本的采集处理小鼠分别在致敏后1、2、4、7分为对照组、哮喘组，II一10、1L—l2功能性基因敲除d处死，采集血液、支气管肺泡灌洗液(BALF)等标本，组及IL—l0、IL—l2干预组，除对照组外，每组按采样放置一20℃冰箱保存待测。时间分为不同亚组，各组均为5只小鼠。1．3．2病理学观察取每只小鼠右肺下叶用于石蜡小鼠哮喘模型参照参考文献[31方法建立。小鼠包埋切片，常规行HE染色观察炎症细胞的浸润情况。腹腔注射卵清蛋白(OVA)致敏液进行致敏，第21天以1．3．3各指标的测定采用酶联免疫吸附法测定小OVA溶液进行雾化吸入激发，1

7、次／d，30min／次，连续鼠血清lgE和NO水平及BALF中TNF—d、IL一10和7d。IL一10、IL一12功能性基因敲除组在哮喘组的基础IL—l2含量，严格按试剂盒进行操作。上，于激发前1d，给每只小鼠植人含有抗IL一10、IL一121．4统计学方法采用SPSS17．0统计软件，组问比多克隆抗体的微渗透泵(抗体浓度为0．25mg／mL)，使较采用单因素方差分析(one—wayANOVA)。采用直小鼠失去IL一10、IL一12的功能，使用免疫组化分析线相关分析法分析IL一10与IL一12的相互关系。来验证模型是否成功。IL—l0、IL一12干预组小鼠处2结

8、果理同功能性基因敲除组(