中药制剂对奶牛隐性乳腺炎病原菌抑制作用的研究-论文.pdf

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1、中国畜牧兽医文摘2014年3O卷第7期兽药应用中药制剂对奶牛隐性乳腺炎病原菌抑制作用的研究王卫姜巧云孙云娟(山东省平度市畜牧兽医局，山东平度266700)为了给奶牛乳腺炎的中草药防治提供一定的参考依据，我们养24h。细菌生化特性鉴定，按常规方法进行。选取丹参、金银花、当归、瓜蒌、鱼腥草、土贝母六味中草药和1．2．6抑菌实验将分离的细菌分为3组，分别是革兰氏阳性菌乳房消肿散(主要成分金银花、蒲公英、当归等，煎剂)对奶牛混合液组、革兰氏阴性菌混合液组和真菌组。隐性乳腺炎的几种病原菌进行了分离和体外抑菌试验。2结果1材料与方法2．1乳房炎检测结果1．1试验材料48个乳样中44个有明显可见的絮

2、状沉淀物，乳色发黄。检测1．1．1乳样采集采自青岛市某奶牛场疑似为隐性乳腺炎的奶结果4个为阴性，44个为阳性，其中强阳性或强阳性以上的为27牛，共取48份奶样。不能及时检验的样品保存于一20cc冰箱中。个。1．1．2血样采集牛血样：无菌采自本校兽医院内健康青年2．2直接显微镜检查黄牛。兔血浆：购自杭州天和微生物试剂有限公司，批号为在阳性乳中抽取奶样涂片，革兰氏染色及美蓝染色，可见到2013080。葡萄球菌、成双或是短链球菌、棒状杆菌等革兰氏阳性菌，以及1．1．3中草药水煎剂丹参、金银花、当归、瓜蒌、鱼腥草等中革兰氏阴性的两端钝圆的短杆菌、直而细长的杆菌、两极浓染的草药购自平度市中医院。

3、将上述中药分别取单味药20g，加200ml细小杆菌。水样奶压滴标本中，有的乳样中有大量球形孢子，有水煎煮，沸后文火加热30min，滤出药液，共煎2次，合并药液浓的有假菌丝，革兰氏染色阳性。缩至2Oml，得到生药浓度为1咖1的水煎剂，置于4℃冰箱中保存2．3生化鉴定结果备用。本实验共分离到无乳链球菌株5株，停乳链球菌1株，金黄色1．1．4主要试剂氨苄青霉素、链霉素、庆大霉素、氧氟沙星葡萄球菌26株，凝固酶阴性葡萄球菌1O株，变形杆菌4株，大肠杆药敏纸片，购自上海伊华医学科技有限公司，批号2013o2O；细菌菌9株，G芽胞杆菌6株。培养基及生化试验培养基均按常规方法制备；隐性乳房炎检测试2

4、．4抑菌试验结果剂：由德国海德公司制造，中国成都方良生态信息实业有限公司由试验结果可知，中药丹参对金黄色葡萄球菌参考菌株抑菌分装销售。圈直径为23ram，对大肠埃希氏杆菌参考菌株不敏感，对所有分离1．1_5参考菌株标准金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏杆菌菌株，菌均为高敏。当归对金黄色葡萄球菌参考菌株为中敏，对大肠埃由山东农业大学预防兽医学研究室提供。希氏杆菌参考菌株高敏，对分离菌中停乳链球菌和G一杆菌高敏，1．1．6其他器材培养基：普通营养琼脂培养基、麦康凯琼脂培而对其余菌株不敏感。金银花、鱼腥草对参考菌株不敏感，对分养基，杭州天和微生物试剂有限公司生产。超净工作台、恒温培离菌株中变形杆菌中

5、敏。瓜蒌所有菌株均不敏感。而方剂对参考养箱、烤箱、冰箱、高压灭菌锅、显微镜以及烧杯、培养皿、试菌株和分离菌株均高敏，平均抑菌圈在20mm以上。对照组中氨苄管等若干以及革兰氏染色液。青霉素对停乳链球菌高敏(抑菌圈直径18mm)，链霉素对表皮1．2试验方法葡萄球菌高敏(抑菌圈直径22mm)I．2．1培养基的制备普通营养琼脂培养基和麦康凯培养基按常3讨论规方法制备后高压灭菌消毒。无菌将牛鲜血以5％一7％的比例加(1)从乳房炎的检测结果来看，48个乳样中阴性乳样为4入消毒好的30cc一40℃营养琼脂培养基中。各培养基分别倒平皿个，而阳性乳样有44个，占91．7％，表面上看乳房炎阳性率非常和血斜

6、面，冷却后存于冰箱备用。高。1．2．2乳房炎检测每个乳样取2ml于测试盘中稍泡后，加入等(2)通过对44个阳性乳样进行细菌分离鉴定，共得到l7种量乳房炎指示剂混合，跟据混合液的浓度来判断牛奶中体细胞的98个菌株。其中葡萄球菌的分离率最高，为42．86％，链球菌占含量，并据此检测奶牛乳房的健康状况。18．37％，革兰氏阴性杆菌占22．44％。说明青岛地区奶牛乳房炎以1．2．3奶样涂片镜检在玻片上划lcm方格，取16倍稀释乳1葡萄球菌为主要病原菌，而且以2～3种病原菌感染为主，甚至由3滴，涂成均匀薄膜，自然干燥，二甲苯除去乳脂，酒精固定，美种以上病原菌感染，而单纯由某一种细菌感染的情况较少

7、，混合蓝染色，油镜观察。感染相当严重，可能这与牛场的消毒管理不严有一定的关系。1．2．4细菌分离将所采的46份乳样摇匀，无菌吸取0．1ml注入(3)通过抑菌试验结果，可以看出丹参对所分离的细菌都血平板中，用接种环划匀，37℃培养24h，有菌落生长时，仔细有较强的抑制作用，而且对葡萄球菌的抑菌效果明显优于氨苄青观查菌落形态，挑取可疑菌落涂片染色，在油镜下仔细观察，若霉素，但低于链霉素。当归对停乳链球菌有较强的抑制作用；同细菌染色特征、形状、大小一