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《α-淀粉酶基因amyP的原核表达及酶学性质初步分析-论文.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、第8期(总第362期)农产品加工(学刊)No.82014年8月AcademicPeriodicalofFarmProductsProcessingAug.文章编号:1671—9646(2014)08b一0033—020c一淀粉酶基因amyP的原核表达及酶学性质初步分析赵金海,杨灵,张志芳,李轶女(1.河南省轻工业学校轻工工程系,河南郑州450000;2.中国农业科学院生物技术研究所,北京100081)摘要:一淀粉酶作为一种十分重要的酶制剂,目前工业上都是以微生物发酵法大规模生产的。从耐高温菌株Geobacillus.P
2、OT一5基因组中,用PCR的方法扩增得到该菌的仅一淀粉酶基因,此基因被克隆、测序,并在原核Escherichiacoli表达系统中进行表达,并对该重组酶的酶学性质进行初步的分析。关键词:Ot一淀粉酶;原核表达;酶学性质中图分类号:Q75文献标志码:Adoi:10.3969/jissn.1671—9646(X).2014.08.044ProkaryoticExpressionandEnzymaticPropertiesAnalysisofOt—.AmylasesGeneamyPZHAOJm-hal,YANGLingI,Z
3、HANGZhi-fand,"LIYi-nC(1.LightIndustrialEngineeringDepartment,He‘nanLightIndustrySchool,Zhengzhou,He’nan450000,China;2.BiotechnologyResearchInstitute,ChineseAcademyofAgriculturalSciences,Beijing100081,China)Abstract:0【一amylaseisaveryimportantenzyme.themassproduct
4、ionof-amylaseisbasedonmicroorganismfermentationintheindustryatpresent.Thegeneof0【-amylases(amyP)isamplifiedfromthegenomeofthethermostablestrainGeobacillus.POT-5byPCR.Thisgeneiscloned,sequenceanalysisandexpressedinprocaryoticexpressionsysteminE.coli.Thisstudyalso
5、developsapreliminaryanalysisofenzymepropertiesabouttherecombinant0【-amylase.Keywords:Ot—amylase;procaryoticexpression;enzymaticcharacteristic一淀粉酶(EC3.2.1.1)是从淀粉糖链内部随1材料与方法机切断一1,4一葡萄糖苷键,生成糊精和还原糖的一种内切酶类。其广泛存在于动物、植物和微生物1.1材料与试剂中,能使黏稠的淀粉糊很快失去黏性而液化,碘的呈GeobacillusPOT一
6、5由本实验室筛选分离所得。色反应很快消失,故又称为淀粉液化酶【”。自1894年大肠杆菌DH10B,BL21,克隆载体pMD18一T,表开始工业生产淀粉酶以来,该酶已成为目前用途最达载体pET22b(+),均由笔者所在实验室保存。高保广产量最大的酶制剂之一,占到了整个酶制剂市场真DNA聚合酶Platinumpfu,Invitrogen公司产品;份额的25%左右,大量应用于粮食加工、食品工业、各种限制性内切酶,T4DNA连接酶及配套缓冲液,酿造、发酵、纺织、医药等行业。淀粉酶的来源很Promega公司产品;生化试剂IPTG
7、,SDS及可溶性广泛,可以来自于植物、动物以及微生物。大部分的淀粉,Sigma公司产品;胰蛋白胨、酵母抽提物,淀粉酶存在于微生物,目前许多种来源于真核和原核OXOID公司产品;PCR寡核苷酸引物由nvitrogen生微生物的Ot一淀粉酶被分离,其基因已被克隆囝。物公司合成;其他均为分析纯试剂。本研究从嗜热菌Geobacillus.POT一5中克隆了1.2方法0【一淀粉酶(仅一amylases)基因,使其在大肠杆菌表1.2.1DNA操作技术达系统中得到了表达,并对该重组仅一淀粉酶的酶参照分子克隆实验指南[3]进行DNA基
8、本操作技学性质进行了初步的研究。术,如质粒的提取、感受态细胞的制备和转化等。收稿日期:2014—06—20基金项目:国家自然科学基金资助项目(31070139)。作者简介:赵金海(1962一),男,本科,高级讲师,研究方向为食品生物技术。’通讯作者:李轶女(1972一),女,博士,副研究员,研究方向为病毒分子生物学。农产品加工(学
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