全反式维甲酸联合苦参素干预SD大鼠肝癌变进程中β-catenin的动态表达-论文.pdf

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1、第41卷第6期河南师范大学学报(自然科学版)Z．41No．62Ol3年11月JournalofHenanNormalUniversity(NaturalScienceEdition)NOV．2013文章编号：1ooO一2367(2013)06—0118—04全反式维甲酸联合苦参素干预SD大鼠肝癌变进程中t3-catenin的动态表达刘丹丹，职丽娟，乔丹，王美娟，马明霞，吕昆伦，张红绪(1．河南师范大学生命科学学院，河南新乡453007；2．新乡学院，河南新乡453000)摘要：用全反式维甲酸(ATRA)联合苦参素(OMT)对由二乙基亚硝胺(DENA)诱发建立的SD大鼠肝癌变动物模型进行联

2、合干预．采用免疫组化及Westernblot法对大鼠肝癌演变进程及药物干预后3-catenin的表达变化进行研究．结果显示，在肝癌变进程中，诱癌组3-catenin的表达逐渐升高，在重度炎性反应期(HI)至肝癌期(CCC)呈极显著性差异(P<0．05，P<0．01)，并出现异位转移现象，其表达从肝细胞间质／胞膜逐渐转移至胞浆／胞核；干预组总3-catenin的表达在整个癌变进程中均显著低于诱癌组，且非典型性腺瘤样增生期(AAH)至CCC期呈极显著性差异(P

3、中3-eatenin的上调速度，阻碍异位转移的进行，在一定程度上延缓和推迟肝癌的发生发展．关键词：sD大鼠；肝癌；全反式维甲酸；苦参素；3-catenin中图分类号：Q581；R735．7文献标志码：A连环素(13一catenin)又称8一连环蛋白，可与E—cadherin的胞内区形成复合体，介导细胞间的粘附，同时它也是wnt／wg信号通路的枢纽，参与肿瘤的发生过程l1』．全反式维甲酸(all—transretinoicacid，ATRA)即维A酸，具有很强的抗肿瘤作用，苦参素(oxymatrine，OMT)是中药苦参(SophoraFlavescensAit)的有效成份，具有消炎、抗病

4、毒、抗纤维化、抗肿瘤等功能，可诱导肝癌细胞株向正常肝细胞方向分化．ATRA与OMT在以往肝癌的预防和治疗中多起辅助作用，以两者联合干预为主的治疗方案尚未见报道，且目前关于p—catenin的研究大多集中在成癌期的表达变化上，对癌变进程中不同时期13-catenin的变化研究较少．为揭示肝癌变机理及寻找新的副作用小的有效治疗药物，本研究用二乙基亚硝胺(n-nitroso—diethylamin，DENA)建立大鼠肝癌变动物模型]，同时用ATRA联合OMT(ATRA+OMT)干预其癌变进程，系统地研究了3-catenin在整个肝癌演变进程及药物干预后表达的变化．1材料与方法1．1大鼠肝癌动物

5、模型的建立11O只SD大鼠(SPF级，购于河南省实验动物中心)，6周龄，雄性，(120±25)g．将其随机分成3组，其中对照组2O只，诱癌组45只，干预组45只．肝癌动物模型的建立方法参阅刘丹丹等，其中干预药物维A酸片(山东良福药业)灌胃剂量为1mg／kg·bw．1．2试剂3-catenin多克隆抗体(Boster)；actin单克隆抗体、碱性磷酸酶标记山羊抗兔IgG及羊抗兔二步法免疫组化检测试剂(北京中杉金桥)．1．3取材与病理分级从灌胃之日起，分别在2、4、6、8、10、12、14、16、18w处死大鼠，取其肝组织．方法同参考文献2和3．1．4免疫组化和Westernblot收稿日期

6、：2013—08—01基金项目：河南省重点科技攻关项目(122102310174)，河南省动物重点学科资助作者简介：刘丹丹(1982)，女，河南禹州人，河南师范大学讲师，主要从事哺乳类癌前病变分子机理的研究通讯作者：张红绪(1955一)，男，河南洛阳人，河南师范大学教授，E—mail：hxzh5571@sina．corn．第6期刘丹丹，等：全反式维甲酸联合苦参素干预SD大鼠肝癌变进程中t?-catenin的动态表达119一抗~-catenin抗体和actin抗体按1：100稀释使用．方法均见试剂说明书1．5统计分析用SPSS17．0软件对大鼠肝癌变各时期组间数据进行f检验．2结果2．1组

7、织病理分级依据病理学变化及分类标准将大鼠肝组织分为：正常(normal，N)；轻度炎性反应(1ightinflammation，LI)；重度炎性反应(heavyinflammation，HI)；腺瘤样增生(adenomatoushyperplasia，AH)；非典型性腺瘤样增生(atypical—adenomatoushyper—plasia，AAH)；肝胆管细胞癌(cho1angioce1lularcarcinoma，CCC)．2