壳聚糖即型水凝胶的体内代谢研究-论文.pdf

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1、宋福来等：壳聚糖即型水凝胶的体内代谢研究文章编号：1001—9731(2014)14—14057—04壳聚糖即型水凝胶的体内代谢研究宋福来，马海楠，韩宝芹，邵凯，刘万顺(1．中国海洋大学海洋生命学院，山东青岛266003；2．青岛博益特生物材料有限公司，山东青岛266101)摘要：壳聚糖及其衍生物作为生物医用高分子材2实验料已被广泛应用，研究其在动物体内的吸收降解是此类生物医用材料应用于人体的必要前提。壳聚糖即型2．1材料仪器水凝胶是以壳聚糖为主要材料制备的新型生物医用材壳聚糖即型水凝胶(chitosan

2、basedinsituform—料，可在体内降解吸收。以异硫氰酸酯(FITC)标记法inghydrogel，ChG)，简称壳聚糖水凝胶，实验室自制；研究了该水凝胶经大鼠腹腔注射后的吸收、降解和分异硫氰酸酯荧光素(fluoresceinisothiocyanate，布，为该水凝胶应用于体内提供实验数据。实验结果FITC)，Sigma公司；荧光标记的壳聚糖即型水凝胶显示，壳聚糖即型水凝胶经大鼠腹腔注射后能够较快(FITC—ChG)，实验室制备，其中对改性壳聚糖进行的被腹腔吸收，并经血液转运至各代谢器官，在肝脏

3、内有FITC标记量为137mg／g；Wistar大鼠，雌雄各半，一过性的积累，在其它脏器内分布较少，其主要代谢途(200±20)g，96只，山东鲁抗医药股份有限公司实验径是血液一肝脏一肾脏一尿液，在17d时，通过此途动物中心，许可证号SCXK鲁20080002；RF一530PC荧径排出的量占注射量的88，排出体外的分子量均小光分光光度计，日本Shimadzu；Breeze1525高效液相于10kD。色谱系统，日本Shimadzu；磷酸盐缓冲液(phosphate关键词：壳聚糖；水凝胶；代谢bufferso

4、lution，PBS)，0．02mol／L，PH值一8．0。中图分类号：R318．08i0629．9文献标识码：A2．2实验方法DoI：10．3969／j．issn．1001—9731．2014．14．0112．2．1样品浓度与荧光强度的标准曲线用荧光分光光度计测定不同稀释倍数的荧光素1引言(FITC)以及荧光素标记的壳聚糖即型水凝胶(FITC壳聚糖是以D一氨基葡萄糖为结构单元的天然高ChG)的荧光强度(E一490nm，E一520nm)，制作分子氨基多糖，具有良好的生物相容性和生物降解性，FITC溶液浓度

5、以及FITC—ChG溶液浓度与荧光强度在生物医用材料领域具有广阔的应用前景j。本实的标准曲线。验室在壳聚糖改性基础上制备了一种壳聚糖即型水凝2．2．2壳聚糖即型水凝胶的体内代谢胶，可作为体内可吸收止血材料。作为一种新型可吸实验大鼠分为3组，空白对照组、FITC组和壳聚收医用材料，研究其在体内的吸收代谢过程是必要的。糖水凝胶组(简称水凝胶组)。空白对照组不作任何给多糖类高分子物质由于结构复杂多样，大多无特药处理，FITC组的每只大鼠腹腔注射1mL浓度为征性色谱吸收，定性定量检测手段相对较少，而放射性0．4m

6、g／mI的FITC溶液，水凝胶组每只大鼠腹腔注同位素标记法的技术要求则较高，这些都在一定程度射1mLFITC标记的壳聚糖即型水凝胶，FITC组和上限制了多糖类物质及制品的体内代谢研究水平。水凝胶组分别在6，12h，1，2，3，4，5，6，7，9，11，14，18荧光素标记法是抗体、酶等蛋白物质常用的标记研究和21d处设置检测点采集实验样品，空白对照组在最方法，由于壳聚糖分子中存在大量的NH，能够与异后检测点时采集样品。另将注射剩余的FITC溶液和硫氰酸酯等荧光素分子联接反应，目前已经越来越多FITC标记壳

7、聚糖水凝胶溶液在室温下避光保存(保存的被应用于壳聚糖类物质的标记与研究。液)，与各检测点采集的样品一同进行分析检测，以排本文采用异硫氰酸酯荧光素(FITC)标记法，研究除荧光衰减的干扰。了壳聚糖即型水凝胶在大鼠体内的代谢情况，测定分在各检测点，按以下方法采集样品：析了该水凝胶在大鼠腹腔内的吸收、分布和排泄情况，尿液：3组中各随机选择6只大鼠作为21d检测为该多糖类水凝胶制品在体内的应用提供理论支持。点，单独饲养在代谢笼中，每隔12h采集一次尿液。收集尿液记录其体积，5000r／min离心，保存上清液。*基

8、金项目：国家高技术研究发展计划(863计划)资助项目(2014AA093605)收到初稿日期：2013一l1一O6收到修改稿日期：20140122通讯作者：刘万顺，E—mail：WanshunIiu@hotmail．CON作者简介：宋福来(1985一)，男，山东德州人，在读博士，师承刘万顺教授，从事海洋生物医用材料研究。14o58助舷材料2014年第14期(45)卷腹腔液：大鼠腹腔中注射5mLPBS，冲洗充分后吸为原注射量的0