与ezrin基因表达相关的微小RNA的筛选及在肝细胞癌浸润转移中的作用-论文.pdf

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1、第23卷第36期China中Jo国ur现na代lo医fM学od杂er志nMedicineV01．23No-362013年12月Dec．2013文章编号：1005—8982(2013)36-0005-06·论著·与ezrin基因表达相关的微小RNA的筛选及在肝细胞癌浸润转移中的作用刘碧英，李坚(中南大学卫生部肝胆肠外科研究中心，湖南长沙410008)摘要：目的筛选肝癌细胞中与ezrin基因表达相关的微小RNA(miRNA)，并分析其在肝癌浸润转移中的作用。方法①实时逆转录(RT)PCR技术和蛋白印迹法分别检测两对具有不同侵袭转移

2、能力的肝癌细胞系HepG2和HepG2一x细胞及SF7721和SMMC一7721细胞中ezrinmRNA和蛋白的表达差异，选取其中eznnmRNA和蛋白表达差异相对较大的1对细胞系(即SF7721和SMMC一7721细胞)用于以下实验。②用miRNA芯片筛选SF7721和SMMC一7721细胞中差异表达miRNA，然后用生物信息学工具f三大数据库，即TARGETscAN(http：／／www．targetscan．org)、MICROCOSM(http：／／www．ebi．ac．Uk／enright—srv／mi—crocos

3、m／htdocs／targets／vS／)和PICTAR(http：／／Ⅵ，ww．pictar．mdc—bedin．de)数据库1预测并比对miRNA芯片的筛选结果，筛选出与ezfin基因表达相关的miRNA，并采用实时RT—PCR技术验证。将筛选出来的miRNA转染SF7721细胞，用蛋白印迹法和实时RT—PCR技术检测其对SF7721细胞中ezrinmBNA和蛋白表达的调控作用，以未做任何处理者为空白对照。结果①SF7721细胞中ezrinmRNA的表达水平是SMMC-7721细胞的(62．53±4．37)倍，HepG2-

4、X细胞中ezrinmRNA的表达水平是HepG2细胞的(2．61±0．23)倍，两者分别比较，差异均有显著性(P<0．01)；蛋白印迹法检测显示，SF7721细胞中ezrin蛋白的表达强度明显高于SMMC一7721细胞，HepG2一X细胞中ezrin蛋白的表达强度明显高于HepG2细胞。选取其中ezrinmRNA和蛋白表达差异相对较大的l对细胞系，即SF7721和SMMC一7721细胞用于以下实验。②将miRNA芯片筛选结果与生物信息学工具预测结果对比分析，筛选出两个可能调控ezrin基因表达的特异rniRNA，即miR一18

5、3和n1iR-22；实时RT—PcR技术检测显示，miR一183和miR-22在SF7721和SMMC-7721细胞中的表达差异，与miRNA芯片筛选结果一致，SMMC一7721细胞中miR一183和miR一22的表达水平分别是SF7721细胞的(7．21±1．16)和(8．52±1．43)倍．两者分别比较，差异均有显著性(P<0．01)。miRNA转染SF7721细胞后，其ezrinmRNA的表达水平是空白对照的(1．27±0．26)倍，两者比较，差异无显著性(P>0．O5)；而ezrin蛋白的表达强度则明显低于空白对照。结

6、论侵袭力强的肝癌细胞中ezrinmRNA和蛋白均高表达，与ezrin基因表达相关的miRNA—miR一183和miR一22的过度表达均能有效调节侵袭转移相关基因ezfin蛋白的表达水平，它们可能具有ezrin基因介导的抑制肝癌细胞浸润转移的潜在功能。关键词：肝癌；微RNAs；细胞支架蛋白质类；肿瘤转移中图分类号：R735．7文献标识码：APotentialroleofezrinanditsrelatedmicroRNAinLivercancerinvasionandmetastasisLIUBi-ying，LIJian(Nat

7、ionalHepatobiliary&EntericSurgeryResearchCenter,Changsha,Hunan410008,P．R．China)Abstract：【Objective】ToscreenmicroRNA(miRNA)thatinhibitexpressionofthemetastasisrelatedgeneezrininlivercancercellsandexploretheircorrelationtotheinvasionandmetastasisofolivercancer．【Method

8、s】The收稿日期：2013—01—21【作者简介]刘碧英，现工作单位为湖南长沙卫生职业学院医学基础学科部[通信作者】李坚，E-mail：lijian869@126．corn，Tel：13787182978·5·中同现代医学杂志第23卷diferentialexpressio