HBV反转录酶区rtA181S变异与阿德福韦酯耐药相关性研究-论文.pdf

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1、传染病信息2013年12月30日第26卷第6期InfectDisInfo，V。1．26，N。．6，December30，2013．339．HBV反转录酶区rtA181S变异与阿德福韦酯耐药相关性研究杨菁，刘妍，陈容娟，许智慧，陈丽，辛绍杰，刘新光，徐东平[摘要】目的分析HBV反转录酶(RT)区rtA181S变异与阿德福韦酯(ADV)耐药的相关性。方法应用直接测序法筛选分析大样本慢性HBV感染者rtA181S变异的检出频率，并对1例接受ADV单药治疗失败的慢性乙型肝炎患者血清中HBVRT区基因进行克隆测序，分析相关变异形式。用0I和SphI双酶切pGEM—

2、TeasvRT及pTilE一HBV(C)载体后再连接，构建1

3、1倍HBV野生株和耐药株的重组质粒，转染人肝癌细胞系HepG2细胞，5h后分别加入不同浓度的ADV(0、0．033、0．100、0．330、1．000、3．300Ixmol／L)。隔天换药，4d后收集细胞上清，采用实时荧光定量PCR法检测不同药物浓度作用下细胞培养上清中的HBVDNA载量，并分析其表型耐药特点。结果9830例慢性HBV感染者的12000个血清样本中，有46例样本检出rtA181S变异(单独或与其他耐药变异联合出现)，在653例中检出经典的rtN236T／A181V变异。其中随访

4、的1例在接受ADV治疗19个月后出现了病毒学和生化学突破，直接测序检出rtA181S+N236T变异，克隆测序分析显示在24个克隆中11个(45．83％)为野生型，6个(25．00％)为rtN236T变异型，5个(20．83％)为rtA181S变异型，1个(4．16％)为rtA181V变异型，1个(4．16％)为rtA181S+N236T变异型。在体外实验中，rtN236T、rtA181S和rtA181S+N236T变异株的相对复制力分别是野生株的91．35％、29．90％和68．53％。表型耐药分析显示rtN236T、rtA181S和rtA181S+N

5、236T变异株对ADV的灵敏性分别为野生株的1，4．41、l／3．05和1／5．43。结论rtA181S是_种ADV耐药相关变异，可单独或联合其他变异引起患者耐药。但与经典ADV耐药变异相比，rtA181S变异引起的ADV耐药相对较弱，临床检出率较低。【关键词】乙型肝炎病毒；基因，病毒；抗药性；阿德福韦酯【中国图书资料分类号】R373．21；R915[文献标志码】A[文章编号】1007—8134(2013)06～0339—04rtA181SmutationinthereVerse—transcriptasedomainofHBVisassociatedw

6、ithadefovirdipivoxilresistanceYANGJing，LIUYan，CHENRong-juan，XUZhi-hui，CHENLi，XINShao-jie，LIUXin-guang，XUDong-pingInstituteofBiochemistryandMolecularBiology，SchoolofLaboratoryMedicine，GuangdongMedicalCollege，Dongguan，Guangdong523808，ChinaCorrespondingauthor．LIUYan，E-maihliuyan5360

7、@163．com；XUDong-ping，E-mail：xudongping302@sina．corn[Abstract]ObjectiveToanalyzetheassociationbetweenrtA181Smutationinthereverse—transeriptasefaT)domainofHBVandadefovirdipivoxilfADV)resistance．MethodsIncidenceofrtA181SmutationofHBVRTregionwasscreenedandanalyzedfromlargesamplesofch

8、ronicallyHBV-infectedpatientsbydirectsequencing．Clonalsequencingwasperformedanddrug—resistance—associatedmutationswereanalyzedfromtheselumofanADV-refractorypatientwithchronichepatitisB．pGEM—TeasyRTplasmidandpTriEx—HBV(C)plasmidweredigestedandligatedbytherestrictionenzymeheI／SphI)

9、，andthe1．1-ploidgenomelengthHBVrecombina