丹皮酚对结肠癌细胞系LoVo细胞增殖、凋亡的影响及其机制-论文.pdf

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1、中国医药导报2014年3月第1l卷第7期论著·丹皮酚对结肠癌细胞系LoVo细胞增殖、凋亡的影响及其机制李明谭诗云武汉大学人民医院消化内科．湖北武汉430060【摘要】目的观察丹皮酚对人结肠癌细胞系LoVo细胞增殖、凋亡的影响及探讨可能的作用机制。方法用不同浓度丹皮酚处理体外培养的IJoV0细胞24、48、72、96h，CCK一8比色法测定其对结肠癌LoVo细胞的活力的影响：倒置显微镜下观察细胞的形态学变化；根据CCK一8结果分为丹皮酚组(浓度31．25、62．50、125mg／L)和对照组，处理48h后，流式细胞仪检测细胞凋亡；激光共聚焦显微镜检

2、测细胞内Ca浓度的变化；RT—PCR和Westernblot法检测RUNX3基因表达情况。结果丹皮酚能显著降低LoVo细胞存活率，呈剂量、时问依赖性；倒置显微镜下可观察到典型的细胞凋亡形态；丹皮酚组(浓度31．25、62．50、125mg／L)处理细胞48h后．凋亡率分别为(12-3±1．3)％、(22．4+1．5)％、(36．2+2．1)％，与对照组[凋亡率(2．3±0．9)％]比较，差异均有统计学意义(P<0．05)；丹皮酚组处理48h后，细胞钙离子荧光强度分别为(41．36_+4．62)，(57．51+3．83)和(69．43~3．76)，

3、与对照组【荧光强度(24：45+3．74)1比较，差异均有统计学意义(P<0．05)；丹皮酚能上调RUNX3基因的表达，呈剂量依赖性。结论丹皮酚能抑制LoVo细胞的增殖并诱导其凋亡，其作用机制可能与增加细胞内Ca含量和上调RUNX3基[太j的表达有关。[关键词】丹皮酚；LoVo细胞；Ca；RUNX一3[中图分类号】R735．3【文献标识码】A[文章编号】1673—7210(2014)03(a)一0023—05EffectsofPaeonoloncellproliferationandapoptosisinhumancolorectalcancer

4、LoVocellsanditsmechanismsLIMingHV／znDepartmentofGastroenterology，RenminHospitalofWuhanUniversity，HubeiProvince，Wuhan430060，China【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheeffectofPaeonolontheproliferationofcolorectalcancerlineLoVoanddis—CUSSitspossiblemechanisms．MethodsLoVocellswerec

5、ulturedinvitro．AftertreatmentbyPaeonolatdifferentcon—centrationsrespectivelyatdifferenttime，thecellsurvivalwasdeterminedbytheCKK一8method．Thechangesofcellmorphologywereobservedbyinvertedmicroscope．Apoptosiswasdetectedbyflowcytometry．Theconcentrationofin—tracellularcalciumwasin

6、vestigatedbylaserconfocalsanningmicroscopewithcalcium—flourecentprobes—Fluo一3／AM．Reversetranscription-polymerasechainreaction(RT—PCR)wasusedformRNAanalysis．Thechangeofproteinexpres—sionofRUNX一3wasdetectedbywesternblot．ResultsFromthedataofCCK-8，thecellproliferationofhumancol—o

7、rectalcancerLoVocellswasinhibitedbyPaeonolinadose—dependentandtime—dependentmanner．Typicalapopto—sismorphologyofLoVocellswasobservedbyinvertedmicroscope．FlowcytometryassaysshowedthatPaeonolsignifi—cantlyinducedapoptosisinLoVocells．AftertreatedwithPaeonolfor48h．theapoptosisrat

8、eofLovocellswasf12．3±1．3)％，(22．4+1．5)％，and(36．2-+2．1)％respectively，w