两种方法制备的乙型肝炎疫苗的免疫效果-论文.pdf

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1、中国生物制品学杂志2014年5月第27卷第5期ChinJBiologicalsMay2014．Vo1．27No．5·591．·疫苗研究·两种方法制备的乙型肝炎疫苗的免疫效果郑惠文，杨晓蕾，刘龙丁，顾琴，陈梦娇，许秀雯，曹洁，徐丽兰，孙明波，杨净思中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所生物制品四室，云南昆明650118摘要：目的比较原位共沉淀法(以下简称原位法)和直接吸附法制备的乙型肝炎疫苗的免疫效果。方法采用原位法和直接吸附法制备乙型肝炎疫苗。将小鼠随机分为5组，即原位法疫苗组、直接吸附法(本所佐剂)疫苗组、直接吸附法(进El佐

2、剂)疫苗组、佐剂对照组(铝佐剂+PBS)和空白对照组(PBS)，分别于0,4、8周经小鼠腓肠肌免疫，0．1ml／只，按照《中国药典》三部(2010版)进行疫苗吸附完全性试验及疫苗体外相对效力检测。于初免后第1、2,4、8、12、16周，经小鼠尾动脉采血，分离血清，采用ELISA法测定血清中Anti．HBs水平；于初免后第4、8、12周，各组分别取5只小鼠，经尾动脉采血，分离血清，采用流式细胞术，检测血清中T淋巴细胞亚群分布；于初免后第12周，各组分别取5只小鼠，无菌取脾，分离得到脾单个核细胞mononuclearcell，MNC)，采

3、用酶联免疫斑点试验enzvme．1inkedimmunospotassay，ELISPOT)法检测血清中HBsAg特异性IFN',／分泌水平。结果原位法疫苗组、直接吸附法(本所佐剂)疫苗组、直接吸附法(进口佐剂)疫苗组HBsAg吸附效率分别为95％、95％和96％，疫苗体外相对效力分别为2．2、2．1和2．3，均符合《中国药典>-部(2010版)要求。各疫苗组Anti．HBs阳转率均达到100％，随接种剂次的增加，Anti—HBs水平逐渐升高，于初免后第12周达到高峰，第16周出现下降；初免后第8周，原位法疫苗组Anti．HBsGMT

4、高于直接吸附法(本所佐剂)和直接吸附法(进口佐剂)疫苗组，差异均有统计学意义(P<0．05)，初免后第4、12、16周，差异无统计学意义(P>0．05)。初免后第4、8、12周，各组小鼠血清中CD+CDT细胞水平均未见明显改变，第12周，各疫苗组CD，+CDT细胞水平均高于免疫前，差异有统计学意义(JP<0．O1o各疫苗组分泌IFN',／的斑点形成细胞(spotformingcell，SFC)数明显高于铝佐剂对照组和空白对照组；原位法疫苗组与直接吸附法(本所佐剂)和直接吸附法(进口佐剂)疫苗组相比，SFC数差异无统计学意义(P>0．0

5、5)。结论两种方法制备的乙型肝炎疫苗均具有较好的免疫效果。关键词：乙型肝炎疫苗；原位共沉淀法；直接吸附法；体液免疫；细胞免疫中图分类号：R373．2+1R392．33文献标识码：A文章编号：1004-5503(2014)05—0591—05ImmuneefectsofhepatitisBvaccinespreparedbytwomethodsZHENGHui—wen，YANGXiao-lei，LIULong—ding，GUQin，CHENMeng-jiao，XUXiu—wen，CAOJie，XULi-lan，SUNMing—be，YA

6、NGJing—siInstituteofMedicalBiology，ChineseAcademyofMedicalSciences&PekingUnionMedicalCollege，Kunming650118，YunnanProvince，ChinaCorrespondingauthor：YANGJing-si，E-'mail：0542@sincacom；SUNMing-bo，E-mail：smb@imbcams．corn．cnAbstract：ObjectiveTocomparetheimmuneeffectsofhepatit

7、isB(HB)vaccinespreparedbyinsituco-precipitationanddirectadsorption．MethodsHBvaccinewaspreparedbyinsituco—precipitationanddirectadsorptionrespectively．BALB／cmiceweredividedintothreetestandtwocontrolgroups．Themiceintestgroup1wereimmunizedi．m．withtheHBvaccinepreparedbyinsi

8、tuco—precipitationatweeks0，4and8respectively，0．1mlforeach，whilethoseintestgroups2and3withthevaccinespreparedby