短程免疫法制备免疫血清的方法和效果论文

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1、短程免疫法制备免疫血清的方法和效果论文【摘要】目的探讨快速制备抗血清的方法和效果。方法采用短程免疫法，以家兔为实验动物，分别用大肠杆菌抗原菌液、绵羊红细胞(SRBC)抗原和鸡蛋黄抗原小剂量连续多次接种后，收集抗血清，对其效价进行测定。结果经大肠杆菌抗原、SRBC抗原和鸡蛋黄等抗原免疫后的免疫血清最终分别达到1∶10240、1∶1200和1∶10240的高效价。结论此方案制备免疫血清所用时间短，效价高，亲和力强，适用于实验教学。【关键词】免疫学技术免疫血清抗原［ABSTRACT］ObjectiveToexplorethemethodoffast-preparingantise

2、rumanditseffect.MethodsUsingshort-rangeimmunization,rabbitsmunizedultipleinoculations,theantiserumimmunizedbyE.coliantigen,SEAandyolkantigenreached1∶10240,1∶1200and1∶10240;respectively.ConclusionTheantiserumpreparedbythistechniqueistime-saving,high-potencyandhigh-affinity,ent.［KEYmunologyt

3、echnique;Immuneserum;Antigen免疫血清是经过抗原免疫的动物血清.freelin离心10min，弃去上清。麦氏比浊法鉴定大肠杆菌，用石炭酸生理盐水稀释其含量至1012/L，取少许做无菌实验，其余菌悬液放冰箱保存。1.2.2SRBC抗原制备无菌抗凝绵羊血2000r/min离心5min，吸去上清，加入等量无菌生理盐水混匀，再次2000r/min离心5min，吸去上清，如此连续洗3次，最后1次离心10min以使红细胞密集管底，直至上清液透明无色再吸去上清液，留密集红细胞备用。用无菌生理盐水将红细胞配成体积分数0.20的SRBC悬液，即为实验用SRBC悬液。

4、1.2.3鸡蛋黄抗原的制备取新鲜鸡蛋1个，用体积分数0.75乙醇消毒，在无菌条件下，于气室一端击一小孔，用无菌吸管将蛋清吸出后，将蛋黄倒入一装有玻璃珠的无菌锥形瓶内摇匀，用生理盐水进行1∶5稀释，置4℃冰箱保存备用。1.3免疫方案［1,2］1.3.1大肠杆菌抗原组首先在颈背部多点皮下接种大肠杆菌菌液抗原1.0mL，第2天在颈背部多点皮下接种菌液抗原0.5mL，第3、4天每天于耳静脉注入菌液0.5mL，第5天于耳静脉注入菌液抗原1.0mL。1.3.2SRBC抗原组首先在颈背部多点皮下接种体积分数0.20的SRBC抗原2.0mL，第2天在颈背部多点皮下接种体积分数0.20的SR

5、BC抗原1.0mL，第3~5天每天于耳静脉注入体积分数0.20的SRBC抗原1.0mL。1.3.3鸡蛋黄抗原组首先在颈背部多点皮下接种1∶5稀释鸡蛋黄抗原1.0mL，第2~4天每天于耳静脉接种1∶5稀释鸡蛋黄抗原0.5mL，第5天于耳静脉注入1∶5稀释鸡蛋黄抗原1.0mL。1.3.4生理盐水对照组首先在颈背部多点皮下接种生理盐水2.0mL，第2天在颈背部多点皮下接种生理盐水1.0mL，第3~5天每天于耳静脉注入生理盐水1.0mL。1.4试血末次免疫后第3天，耳动脉采血2mL，37℃温育1h后，2000r/min离心10min，吸取离心后上清液0.2mL于无菌试管中，再加入0

6、.8mL生理盐水，作1∶5稀释。采用试管凝集试验方法测定大肠杆菌及SRBC抗原免疫血清效价，琼脂凝胶双向扩散试验方法测定蛋黄抗原免疫血清效价。1.5采集免疫血清末次免疫后第6天，心脏采血法［3］采取20mL家兔血液于离心管中，37℃温箱自然凝固，出现血凝块后3000r/min离心20min，将上清液转移到洁净试管中，-20℃冰箱保存。1.6免疫血清终效价鉴定采用ELISA法分别鉴定大肠杆菌、蛋黄免疫血清终效价［1,..4］，补体溶血试验鉴定SRBC免疫血清终效价。2结果2.1免疫血清的初步效价经大肠杆菌抗原、SRBC抗原、鸡蛋黄抗原免疫后的免疫血清初步效价分别达1∶1280

7、、1∶640、1∶32。2.2抗血清的终效价经大肠杆菌抗原、鸡蛋黄抗原、SRBC抗原免疫后的免疫血清终效价分别达1∶10240、1∶10240和1∶1200。3讨论目前，高效价免疫血清的制备基本采用长程免疫法，免疫血清的制备过程需要耗时1个多月。虽然长程免疫法制备的抗血清具有效价高、亲和力强等优点,但是其操作过程较长,期间可能有动物死亡等不利因素。因此，缩短免疫时间来制备抗血清的方法和效果是值得探讨的［5］。本研究选择大肠杆菌抗原和SRBC抗原代表颗粒性抗原，选择鸡蛋黄抗原代表可溶性抗原，采用短程免疫法，5d内分组