短程免疫法制备免疫血清的方法和效果

《短程免疫法制备免疫血清的方法和效果》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、短程免疫法制备免疫血清的方法和效果【关键词】免疫学技术免疫血清抗原［ABSTRACT］ObjectiveToexplorethemethodoffast-preparingantiserumanditseffect.MethodsUsingshort-rangeimmunization,rabbitsmunizedultipleinoculations,theantiserumimmunizedbyE.coliantigen,SEAandyolkantigenreached1∶10240,1∶1200and1∶10240;respective

2、ly.ConclusionTheantiserumpreparedbythistechniqueistime-saving,high-potencyandhigh-affinity,ent.［KEYmunologytechnique;Immuneserum;Antigen免疫血清是经过抗原免疫的动物血清，含有特异性免疫球蛋白(Ig)，可直接应用于病原体的诊断或感染性疾病的紧急预防和治疗，也可通过进一步纯化血清中的Ig，用于多种疾病的诊断和治疗，是一种非常重要的生物制品。制备免疫血清成为学生必需具备的实验技术。在以往的免疫血清制备实验课中,制备

3、高效价免疫血清基本采用大剂量长程免疫法，该方法具有产物效价高、亲和力强的优点，但耗时过长，给研究造成一定的影响。为了探索快速制备免疫血清的新方法,本研究选取大肠杆菌抗原和绵羊红细胞(SRBC)抗原作为颗粒性抗原，选取鸡蛋黄抗原作为可溶性抗原［1］,采用小剂量短程免疫法制备免疫血清,以探讨该方法的可行性。1材料和方法1.1试剂与器材1.1.1抗原大肠杆菌（泰山医学院临床微生物学教研室保存），SRBC，新鲜鸡蛋。1.1.2实验动物健康家兔32只，雄性，体质量2.0～2.5kg，无免疫史，由泰山医学院实验动物中心提供。随机分成大肠杆菌抗原组、SRB

4、C抗原组、鸡蛋黄抗原组、生理盐水对照组，每组8只。1.1.3器材与试剂紫外线分光光度计；摇床恒温水浴箱；离心机；振荡器；灭菌大试管；LB液体培养基或肉汤培养基；麦氏比浊管；体积分数0.05石炭酸溶液；磷酸盐缓冲液；盐酸溶液；HRP-Ab等。所有实验用材料均经灭菌处理。1.2抗原的制备1.2.1大肠杆菌抗原的制备将大肠杆菌接种到营养琼脂培养皿上，37℃培养18~24h，取单菌落接种于LB液体培养基或肉汤培养基中，37℃培养18~24h，按照1%的比例转种于LB液体培养基或肉汤培养基中，37℃培养18~24h，收集培养液。沸水浴1h后3000r/

5、min离心10min，弃去上清。麦氏比浊法鉴定大肠杆菌，用石炭酸生理盐水稀释其含量至1012/L，取少许做无菌实验，其余菌悬液放冰箱保存。1.2.2SRBC抗原制备无菌抗凝绵羊血2000r/min离心5min，吸去上清，加入等量无菌生理盐水混匀，再次2000r/min离心5min，吸去上清，如此连续洗3次，最后1次离心10min以使红细胞密集管底，直至上清液透明无色再吸去上清液，留密集红细胞备用。用无菌生理盐水将红细胞配成体积分数0.20的SRBC悬液，即为实验用SRBC悬液。1.2.3鸡蛋黄抗原的制备取新鲜鸡蛋1个，用体积分数0.75乙醇消

6、毒，在无菌条件下，于气室一端击一小孔，用无菌吸管将蛋清吸出后，将蛋黄倒入一装有玻璃珠的无菌锥形瓶内摇匀，用生理盐水进行1∶5稀释，置4℃冰箱保存备用。1.3免疫方案［1,2］1.3.1大肠杆菌抗原组首先在颈背部多点皮下接种大肠杆菌菌液抗原1.0mL，第2天在颈背部多点皮下接种菌液抗原0.5mL，第3、4天每天于耳静脉注入菌液0.5mL，第5天于耳静脉注入菌液抗原1.0mL。1.3.2SRBC抗原组首先在颈背部多点皮下接种体积分数0.20的SRBC抗原2.0mL，第2天在颈背部多点皮下接种体积分数0.20的SRBC抗原1.0mL，第3~5天每天

7、于耳静脉注入体积分数0.20的SRBC抗原1.0mL。1.3.3鸡蛋黄抗原组首先在颈背部多点皮下接种1∶5稀释鸡蛋黄抗原1.0mL，第2~4天每天于耳静脉接种1∶5稀释鸡蛋黄抗原0.5mL，第5天于耳静脉注入1∶5稀释鸡蛋黄抗原1.0mL。1.3.4生理盐水对照组首先在颈背部多点皮下接种生理盐水2.0mL，第2天在颈背部多点皮下接种生理盐水1.0mL，第3~5天每天于耳静脉注入生理盐水1.0mL。1.4试血末次免疫后第3天，耳动脉采血2mL，37℃温育1h后，2000r/min离心10min，吸取离心后上清液0.2mL于无菌试管中，再加入0.

8、8mL生理盐水，作1∶5稀释。采用试管凝集试验方法测定大肠杆菌及SRBC抗原免疫血清效价，琼脂凝胶双向扩散试验方法测定蛋黄抗原免疫血清效价。2结果2.1免疫血清的初