单细胞克隆肝癌干细胞向间充质样细胞的分化潜能-论文.pdf

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1、中国肿瘤生物治疗杂志http：／／www．biother．orgChinJCancerBiother，Jun．2014，Vo1．21，No．3·245·doi：10．3872／j．issn．1007-385X．2014．03．002·研究快报·单细胞克隆肝癌干细胞向间充质样细胞的分化潜能刘虹麟，彭亮，王在，许世清，娄晋宁，冉宇靓，杨治华，王培刚，张文健(1．卫生部中日友好医院临床医学研究所，北京100029；2．中国医学科学院肿瘤研究所，北京100021；3．中国科学院生物物理所蛋白质与多肽重点实验室，北京100101)[摘要】目的：探讨单细胞克隆

2、肝癌干细胞(1ivercancerstemcell，LCSCs)向间充质样细胞分化的潜能。方法：通过有限稀释法获得单个细胞来源的LCSC克隆，采用RT—PCR法鉴定干细胞标志物；将该单细胞克隆分别用成骨、软骨和脂肪诱导分化培养基培养3周后，采用Real—timePCR及特殊染色技术比较诱导前后LCSC表达成骨、软骨及脂肪细胞特异标志物的差异。结果：单细胞克隆的LCSC表达多种干细胞标志物、干细胞因子(stemcelfactor，SCF)、干细胞因子受体、C—kit、巢蛋白(nes—tin)、CD34、三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ATP．b

3、indingcassettesub．familyGmember2，ABCG2)、CD133。分化诱导培养3周后，成骨方向诱导的细胞茜素红染色呈现橘红色钙结节形成，软骨方向诱导的细胞阿尔新蓝染色显示蓝色蛋白多糖沉积，脂肪方向诱导的细胞油红O染色显示大量脂滴形成。Real—timePCR结果显示，诱导后成骨细胞特异标志物骨钙素和I型胶原、软骨细胞特异标志物蛋白聚糖和Ⅱ型胶原、脂肪细胞特异标志物脂联素和过氧化物酶体增殖物激活受体的mRNA表达均较对照组显著上调(I型及Ⅱ型胶原间为P<0．05，其他指标间均为P<0．01)。结论：LCSC具有可塑性，在特定

4、的微环境下具有向间充质样细胞分化的潜能。[关键词]肝癌干细胞；单细胞克隆；间充质样细胞；多向分化潜能；可塑性[中图分类号]R735．7；R730．2[文献标志码]A[文章编号]1007—385X(2014)03-0245-06Mesenchymaldifferentiationpotentialofsingle—cellclonedlivercancerstemcellsLiuHonglin，PengLiang，WangZai，XuShiqing，LouJinning，RanYuliang，rangZhihua，WangPeigang，ZhangW

5、enjian(1．InstituteofClinicalMedicalSciences，China—JapanFriendshipHospital，Beijing100029，China；2．CancerInstitute，ChineseAcademyofMedicalSciences，Beijing100021，China；3．KeyLaboratoryofProteinsandPeptidePharmaceuticals，BiophysicsInstitute，ChineseAcademyofScience，Beijing100101，Chin

6、a)[Abstract]Objective：Toinvestigatethemuhilineagedifferentiationpotentialofsingle·cell—clonedlivercancerstemcells(LCSCs)．Methods：SinglecellclonedLCSCsweregeneratedbylimitingdilutioncloningandconfirmedbyRT—PCRanalysisofstemcellmarkers．Phenotype—confirmedLCSCswereinducedtodiffer

7、entiateintoosteoblasts，chondro-cytesandadipocytes，respectively，byculturingthemincorrespondingdifferentiation—inducingmediafor3weeks．Bothbeforeandafterthedifferentiationinductionculture，theexpressionofmarkersspecificforosteoblasts，chondrocytesandadipocyteswascomparativelyanalyz

8、edbyreal-timePCRandcelltype—specificstainingtechniques．Result