气相色谱法操作规程.doc

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1、湖北红八号药业有限公司操作规程HuBeiHongBaHaoPharmaceuticalCo.,Ltd文件标题气相色谱法操作规程文件编码TS-SPY001.00共9页起草人审核人批准人起草日期审核日期批准日期颁发部门GMP办公室执行日期分发部门总经理办公室、质量管理部、生产管理部、市场部变更历史：TS-SPY001.00新订目的：制订气相色谱法操作规程，明确其检查法的操作。依据：《中华人民共和国药典》2015年版；《中国药品检验标准操作规范》2015年版。范围：气相色谱法的操作。责任：质检室主任、化验员。内容：气相色谱法系采用气体为流动相（载气）流经装有填充剂

2、的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。注入的供试品，由流动相带入柱内，各组分在柱内被分离，并依次进入检测器，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。1对仪器的一般要求所用的仪器为气相色谱仪，由载气源、进样器、色谱柱、检测器和色谱处理系统组成，仪器应按现行国家技术监督局“气相色谱仪检定规程”定期检定并符合有关规定。1.1载气源气相色谱法的流动相为气体，称为载气，常用氮气，由高压钢瓶提供，经过减压装置，以一定流速经过进样口和色谱柱。氮气的纯度要求很高，至少99.99%以上，ECD检测器要求99.999%以上，否则，会损坏它。检测器要求氮气净化，经过由硅胶、

3、分子筛（5A或4A型）、活性炭-5-顺序分段填充的干燥管，前二者除去水分，后者吸附烃类化合物。氮气的流速和流量由相应的阀门和检测器控制。1.2进样部分进样方式采用自动进样器。进样口温度应高于柱温30~50°C,进样量不超过数微升，柱径越细，进样量越少，采用毛细管时，一般应分流，以免过载（分流就涉及到分流比：如5：1，就是实际进入色谱柱的量是进样量的1/5，分流比可根据药典品种项下规定在仪器上设置）。1.3色谱柱色谱柱分为填充柱或毛细管柱（为gc的分离系统）。材质为不锈钢或玻璃。常用的固定液有甲基聚硅氧烷（较弱极性）、不同比例组成的苯基甲基聚硅氧烷（中等极性）

4、、聚乙二醇（较强极性）等。新柱必须老化后才能使用，其目的有二：一是彻底除去残留溶剂及易流失的物质；二是促进固定液均匀地、牢固地分布在担体表面。老化的时间从几小时到几十小时不等，使用FID时，毛细管柱至少24小时；使用ECD时，则需要至少48小时。老化时，柱的另一端一定要离开检测器！！！温度低于色谱柱最高使用温度20~30C。老化时，应捎带上进样口（250C、16h），检测器（低于其最高使用温度20~30C），以除去污染物。长时间使用或未用的柱，也应老化，使基线稳定。较易分离的样品使用填充柱，较难分离的样品使用毛细管柱。1.4柱温箱柱温箱控制精度应在+-1C,

5、且温度波动小于每小时0.1C,是因为温度的波动会影响色谱分析结果的重现性。温度控制系统分为恒温和程序升温两种。較窄沸程的样品用恒温，宽费程用程序升温。1.5检测器是将流出色谱柱的载气中被分离组分的浓度（或量）变化，转换为电讯号（电压或电流）变化的装置(是gc的分析系统)。所用的检测器为氢火焰离子化检测器（FID），电子捕获检测器（ECD）。FID对碳氢化合物响应良好，适合检测大多数药物；ECD对亲电子的电负性物质产生信号，适合含卤素的化合物（中药的农药残留）。检测器的温度应高于色谱柱30~50C，通常为250~350C,不得低于150C,以免水汽凝结，影响检

6、测结果。1.6数据处理系统可分为记录仪、积分仪、计算机工作站。它们将从色谱柱流出的组分经检测器检测且经放大器放大后的信号随时间记录下来，且对峰面积进行积分，数据的处理。-5-2系统适用性试验色谱系统的适用性试验通常包括理论板数、分离度、重复性和拖尾因子等四个参数。其中，分离度和重复性尤为重要。按各品种项下要求对色谱系统进行适用性试验，即用规定的对照品溶液或系统适用性试验溶液在规定的色谱系统进行试验，必要时，可对色谱系统进行适当调整，应符合要求。2.1色谱柱的理论板数（n）用于评价色谱柱的效能。由于不同物质在同一色谱柱上的色谱行为不同，采用理论板数作为衡量柱效

7、的指标时，应指明测定物质，一般为待测组分或内标物质的理论板数。在规定的色谱条件下，注入供试品溶液或各品种项下规定的内标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分峰或内标物质峰的保留时间tR(以分钟或长度计，下同，但应取相同单位)和峰宽（W）或半高峰宽（Wh/2）,按n=16（TR/W）2或n=5.54（tR/Wh/2）2计算色谱柱的理论板数。2.2分离度（R）用于评价待测组分与相邻共存物或难分离物质之间的分离程度，是衡量色谱系统效能的关键指标。可以通过测定待测物质与已知杂质的分离度，也可以通过测定待测组分与某一添加的指标性成分（内标物质或其他难分离物质）的分离度

8、，或将供试品或对照品适当的方法降解，通过测定待测组分