肠灌流模型分析课件

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1、在体大鼠肠灌流模型XXXX大学硕士研究生课程在体肠灌流模型是一种广泛应用于药物吸收的原位单向小肠灌流模型。是被FDA认可的进行药物吸收研究的两种模型之一，可以用来对药物或候选药物的进行生物药剂学特性研究。1、在体肠灌注模型产生的背景、发展历史在体肠灌流模型由Dr.GordonL.Amidon’s实验室（DepartmentofPharmaceuticalSciences,CollegeofPharmacy,UniversityofMichigan）在1980’s发明，刚开始每次用一个肠段试验，考察在特定pH下，有无抑制剂对化合物的吸收特性影响。关注于层流的

2、维持与完整，这对于测定化合物的真实膜渗透性(Pw)很重要。后来发现空肠的Pw与人的吸收百分率呈相关性。HansLennernäs.Animaldata:ThecontributionsoftheUssingChamberandperfusionsystemstopredictinghumanoraldrugdeliveryinvivo.AdvancedDrugDeliveryReviews59(2007)1103–1120近来，开始几种不同的方式来优化该模型：第一，同时测定四个肠段(十二指肠、空肠、回肠和结肠)，这一优化显著减少了使用动物的数量；第二，测定

3、部位依赖性代谢产物，这对于确定小肠不同部位代谢物的外排很重要，黄酮和异黄酮的II相代谢的肠外排取决于酶的活性和载体的外排能力；第三，通过插入胆汁导管，确定小肠和肝脏对II相代谢产物的外排的作用；第四，通过测定门静脉母体化合物和其结合物的浓度，确定小肠代谢的程度。RatIntestinalPerfusionModelDJICPerfusionSolutionPerfusate0.1-0.4ml/minHeatedto37oCControlFour-sitesimultaneousperfusionmodelofratintestinePerfusionPum

4、pFlowratemaybechangedtoincreaseabsorption/metabolismduringsinglepassperfusion.该模型的优点是保证了肠道神经以及内分泌输入的完好无损，同时也保证了血液及淋巴液的供应，提高了生物活性。该方法以较低的流速(0.2～0.3mL·min-1)对某一肠段进行单向灌流，根据进出入口处灌流液中的药物浓度差考察药物在该肠段的吸收，其实验条件与口服给药后药物接触的肠道环境较接近，吸收速率稳定，与人体有良好的相关性。特别适合于研究主动转运与小肠代谢。2、模型的特点在体肠灌流模型既可以来确定吸收和代谢的

5、部位，区域吸收和代谢对于设计持续释放剂型提供非常有意义的信息。小肠特定肠段不吸收或其他肠段广泛的首过代谢常用于判断药物是否适合采用持续释放剂型，常采用能避开首过代谢的剂型。在体肠灌流模型中可从肠腔取样，又可从血液、胆汁中取样。虽然这些研究常在麻醉的小动物上进行，但借助肠插管，非麻醉的实验动物及人体的灌流研究亦可进行。在体肠灌流模型不仅提供了较高的组织活性，而且与其他方法相比，是一种操控性好的方法，便于在实验中控制药液的流速和浓度，灌流长段的长度等因素，可对不同肠段进行考察。MaterialsChemicalsHank’sBalancedSalt(modif

6、ied)HBSSD-GlucoseHEPESSodiumBicarbonateNaHCO3SodiumChloride(NaCl)3、模型具体的操作详解与注意Reagents50%乌拉坦溶液HBSSbuffer(pH=6.5or7.4)HBSSpowders9.801g/LNaHCO30.372g/LGlucose3.502g/LHEPES5.963g/LNaCl1.164g/L注意：HBSSbuffer用1L双蒸水溶解，搅拌，用NaOH溶液调节pH。0.22um膜过滤后4°C保存。Equipment灌流泵循环水浴加热灯小电热毯剪刀止血钳镊子OtherMa

7、terials硅胶管注射器对于不同的化合物，选用塑料、玻璃、不锈钢注射器，推荐塑料注射器，价格低廉，可一次性使用。但是会吸附一些化合物AnimalsMaleSpragueDawleyrats,300-375g,70-90daysold.FemaleSpragueDawleyrats,230-280g,80-90daysold.MethodsIntestinalPerfusionStepsandCommentsThefollowingaredetailedstepsfortheperfusionprocedure:手术前大鼠禁食12h，自由饮水；称重并记录；

8、肌肉注射0.2g/mL乌拉坦溶液麻醉(5mL/kg)，止血钳夹趾尖