p53介导的线粒体凋亡通路在燃煤型砷中毒大鼠肝损伤中的作用-论文.pdf

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1、·210·中国药理学与毒理学杂志2014年4月第28卷第2期『门JPharmacolToxicol，Vol28，No2，Apr2014p53介导的线粒体凋亡通路在燃煤型砷中毒大鼠肝损伤中的作用谢婷婷，张爱华(贵阳医学院公共卫生学院毒理学教研室，贵州贵阳550004)摘要：目的了解燃煤型砷中毒大鼠肝细胞凋亡情况及p53介导的线粒体凋亡通路在砷致肝损伤中的作用。方法Wistar大鼠喂饲含砷量分别为0，25，50和1O0mg·kg的饲料，连续90d。采用氢化物发生-电感耦合等离子发射光谱法检测尿砷、毛发砷含量；采用末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导的缺口末端标记法检测肝细胞凋亡情况；

2、采用实时荧光定量PCR检测外周血和肝组织p53，Bax，Bcl2mRNA表达水平；采用Westernblot检测肝组织p53，Bax，Bcl2蛋白水平。结果随染砷剂量增加，大鼠尿砷、毛发砷含量逐渐增高，与正常对照组比较，差异有统计学意义。砷50，100mg·kg组肝细胞凋亡率(分别为16．49±2．O6，15．83-t-1．28)高于砷0，25mg·kg组(分别为9．O0-4_-0．59，9．274-0．36)，差异有统计学意义(P<0．05)。砷100mg·kg组外周血p53mRNA相对表达量(2．694-1．84)和砷25，50，100mg‘kg。。组肝组织p53mR

3、NA相对表达量(分别为1．63±0．28，1．91±0．38，1．71-I-0．18)均高于正常对照组(分别为O．86±0．15，1．224-0．12)；砷50，100mg·kg组外周血BaxmRNA相对表达量(分别为1．36±0．30，1．94±0．65)和砷1O0mg·kg组肝组织BaxmRNA相对表达量(1．34-t-O．23)均高于正常对照组(分别为0．77±0。15，0．84±O．34)；砷1O0mg·kg组肝组织Bcl2mRNA相对表达量(0．98±0．50)低于正常对照组(2．14±1．15)，差异有统计学意义(P<0．05)。砷25，50和1O0mg·kg

4、组肝组织p53蛋白相对表达量(分别为1．06±0．56，1．15±0．77和0．74±0．27)，砷5O和1O0mg·kg组肝组织Bax蛋白相对表达量(分别为0．74±O．43和0．69±0．37)，均高于正常对照组(分别为O．36±0．19和0．25±0．09)，差异均有统计学意义(P<0．05)。结论燃煤砷暴露所致肝损伤可能与砷通过p53调控Bax和Bcl2的表达水平诱导肝细胞凋亡机制有关。关键词：砷中毒；煤；基因，3；细胞凋亡；肝损伤中图分类号：R994．6，R114文献标志码：A文章编号：1000-3002(2014)02-0210—06DOI：10．3867／j

5、．issn．1000-3002．2014．02．011燃煤污染型地方性砷中毒(以下简称燃煤型砷亡可能与燃煤型砷中毒肝损伤的发生发展有关；中毒)是我国特有的一种地方性砷中毒病型，仅分多种凋亡相关蛋白受p53调控。为了解砷致机布于贵州、陕西两省。贵州省病区于1976年发现，体肝细胞凋亡与p53的关系，本研究采用病区高砷至今临床表现典型，病情严重，患者除有典型皮肤病煤烘玉米粉为主要原料配制高砷饲料喂养大鼠建立损外，尚具有多脏器多系统损害及高发癌症，肝硬变砷中毒模型(以下简称燃煤型砷中毒大鼠)，从p53腹水和癌症是其主要死因。鉴于砷中毒危害的严重介导的细胞凋亡通路探讨其在砷中毒大

6、鼠肝损伤中性，多年来，我国政府高度关注地方性砷中毒的防制的作用，为深化揭示燃煤型砷中毒机制提供依据。工作，在病区环境污染控制和人群健康教育上取得了显著成就。由于砷致病致癌机制至今未明，故1材料与方法其一直是该领域研究的热点¨J。有研究显示，细胞凋1．1仪器及试剂VistaMPX型ICP-OES光谱仪(美国Varian基金项目：国家自然科学基金(81172603)；贵州省基公司)，BX51显微镜(El本Olympus公司)，Image。金(黔科合人才团队20124003)；贵州省基金(黔教科ProPlus6．0图像分析系统(美国MediaCybernet_2008020)；

7、教育厅研究生教育创新基金(0215016)作者简介：谢婷婷(1979一)，讲师，博士研究生，主要ics公司)，核酸蛋白分析仪(美国Amersham公从事地砷病发病机制研究。司)，CFX96实时PCR检测系统(美国Bio-Rad通迅作者：张爱华，E-mail：aihuagy@aliyun．com，公司)，小型垂直电泳系统及ChemiDoc⋯。XRS+Tel：(0851)6908908成像系统(美国Bio-Rad公司)。原位细胞凋亡检中国药理学与毒理学杂志2014年4月第28卷第2期Ch／nJa册ac0』Tox／co／，Vol28