TNFα增强肾小球系膜细胞Ⅰ型1,4,5-三磷酸肌醇受体表达受PKCα调控-论文.pdf

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1、中国医师杂志2013年8月第15卷第8期JournalofChinesePhysician，August2013，Vo1．15，No．81Ol3··论著·TNFoL增强肾小球系膜细胞I型1，4，5一三磷酸肌醇受体表达受PKCoL调控闻颖姜旭刘沛【摘要】目的通过研究蛋白激酶Ca(PKCa)参与调控肿瘤坏死因子0【(TNFa)增强肾小球系膜细胞I型1，4，5-三磷酸肌醇受体(IP3RI)表达的信号机制，揭示TNFct引起肝肾综合征肾小球滤过率(GFR)下降的分子机制。方法选择大鼠系膜细胞株(GMCs)进行体外培养。按TNFct处理G

2、MCs的不同时间点，分为对照组(D)、TNFct-2h组、TNFa-4h组、TNFot-8h组、TNFct-24h组，另设2组分别为Sanfingol一8h组(S)、TNFo~+Sanfingol共培养8h组(TS)，共6组。应用免疫细胞化学染色、Westernblot、Realtime-PCR检测方法，观察TNFa孵育的GMCs中IP]RI表达的变化。结果免疫细胞化学染色发现：IP1RI主要分布于GMCs的胞浆内，对照组阳性信号较弱，TNFct处理各组棕褐色阳性信号增强，以TNFe~一8h组最明显。Westernblot分析发

3、现：TNFa-4h组、TNFa一8h组、TNFa一24h组与对照组差异有统计学意义(4h：I．82±0．63，8h：2．95±0．66，24h：2．48±0．72，D：1±0．02，F=9．24，P<0．05)。其中TNFot一8h组、TNFct一24h组IRI表达最高(P<0．05)。S组、TS组与对照组差异无统计学意义(S：1．39±0．65，TS：1．35±0．37，P>0．05)。Realtime—PCR发现：TNFa处理各时间点组与对照组相比IRI表达均明显增加，差异有统计学意义(2h：3．35±1．97；4h：3．1

4、6±1．35，8h：3．70±1．76；24h：4．49±1．70，D：1±0．01，F=6．167，P<0．05)。TNFc~各处理组组间差异无统计学意义(P>0．05)。S组、TS组与对照组比较差异无统计学意义(S：1．53±0．79，TS：1．32±0．38，P>0．05)。结论IRI主要分布于GMCs的胞浆内，TNFa可增加肾小球系膜细胞IRI蛋白、mRNA的表达，并可被PKCa抑制剂Sanfingol所阻断，这可能是肝肾综合征时TNFot引起GFR下降的重要信号机制。[关键词]蛋白激酶c仅；肝肾综合征；肾小球系膜细胞；

5、肌醇磷酸类／代谢；肿瘤坏死因子or．TheregulationrolesofproteinkinaseCalphainenhancedexpressionoftypeIinositol1，4，5-tri-sphophatereceptorsinducedbytumornecrosisfactoralphaWENYing

6、JIANGXuLIUPei．DepartmentofInfectiousDiseases，TheFirstAffiliatedHospitalofChinaMedicalUniversity，Shenyang11

7、0001，ChinaCorrespondingauthor：LIUPei，Email：syliupei2003@yahoo．con．cn【Abstract】ObjectiveToinvestigatethesignalmechanismofproteinkinaseCalpha(PKC—d)DartieipatedinenhancedexpressionoftypeIinositol1，4，5-trisphophatereceptors(IP3RI)inducedbytumornecrosisfactoralpha(TNFa)，

8、inordertodelineatethemechanismsofdecreasedglomerularfiltrationrate(GFR)inhepatorenalsyndromecausedbyTNFa．MethodsTheglomerularmesangialcells(GMCs)linefromratswaschosenasex．perimentalmateria1．GMCsweredividedintocontrol(D)，TNFa-2h，TNF0【-4h，TNFa．8h，andTNFa-24hgroups．More

9、over，anothertwogroupsweresanfingol一8h(S)，TNFa+Sanfingol一8h(TS)groups．TheeffectofTNFo~ontheexpressionofIP3R1wasdetectedbyimmuno—cyto