大鼠肝脏前体细胞通过直接共培养抑制肝星状细胞的活化-论文.pdf

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1、肝脏21)13年12月第18卷第12期·815··论著·大鼠肝脏前体细胞通过直接共培养抑制肝星状细胞的活化孙亚朦杨爱婷王萍丛敏刘天会赵文姗贾继东尤红【摘要】目的观察大鼠肝脏前体细胞系(WB-F344)对肝星状细胞系(HSC-T6)活化及细胞外基质的影响。方法将慢病毒一GFP空白载体转染的HSC-T6与WB-F344按1：1与1：2比例直接共培养3d，使用流式细胞仪对其进行分选，慢病毒一GFP空白载体转染的HSCT6单独培养作为对照，观察HSC-T6活化指标及细胞外基质相关指标表达的变化。结果经流式细胞仪检验慢病毒GFP空白载体转染HSC—T6的效率可达近90；与WB-F344直接共培养3d后，

2、HSC—T6的细胞形态与对照组相比无差别；同时利用GFP对各组HSC—T6细胞分选后，经流式细胞仪检验纯度可达94％0；对分选后的细胞进行分析发现，直接共培养组HSC—T6细胞活化标记物a一平滑肌肌动蛋白(a—SMA)在基因水平(1：1与1：2组分别是对照组的0．66与0．61倍，P<0．05)和蛋白水平(1：1与1：2组分别是对照组的0．61倍与0．25倍，P<0．05)的表达均下降；HSC—T6细胞的细胞外基质标记物I型胶原(Col—I)、基质金属蛋白酶13(MMP一13)、金属蛋白酶组织抑制剂一1(TIMP-1)的表达与对照组比较差异无统计学意义。结论WB-F344细胞可以抑制HSCT6

3、细胞的活化，但在一定时间内对其细胞外基质的表达没有影响。【关键词】直接共培养；细胞活化；细胞外基质；肝星状细胞；肝前体细胞RathepaticprogenitorcellsinhibittheactivationofhepaticstellatecellsthroughdirectcocultureSUNYa—meng，YANGAi—ting，WANGPing，CONGMin，L儿Tian—hui，ZHAOWen—shan，JIAJi—dong，YOUHong．LiverResearchCenter，BeijingFriendshipHospitalAffiliatedtoCapitalMed

4、icalUniversity，Beijing100050，ChinaCDrrP0gauthor：YOUHong，youhong30@sina．COlll[Abstract]ObjectiveToexploretheeffectsofHPCs(WB-F344)onactivationandextracellularmatrix(ECM)ofHSCs(HSC—T6)．MethodsLentivirus—GFPtransfectedHSC—T6wasdirectlycoculturedwithWB-F344at1：1and1：2ratiosfor3days．Mixedcellsweresortedb

5、yflowcytometrybasedonthepresenceorabsenceofGFP．TransfectedHSC—T6cuIturedaIonewasusedascontro1．Expressionofactivationmarkera—smoothmuscleactin(a—SMA)andECMmarkerscollageI(Col—I)，matrixmetalproteinase一13(MMP一13)，tissueinhibitorofmetalloproteinase一1(TIMP)一1inHSC—T6wereobservedbyWesternblotandreal—timeP

6、CR．ResultsAfter3daysofcoculturewithWB-F344，morphologicalchangesofHSC—T6remainedunchangedindirectcocuhuregroups．TransfectionefficiencyofLentivirusGFPwasnearly90andthepurityofsortedHSC—T6was94．WB—F344directlycoculturedwithHSC—T6hadreduced“一SMAexpressionofHSC—T6inmRNAandproteinleve1．However，therewasnod

7、ifferenceinECMexpressionbetweencontrolgroupanddirectcoculturegroups．ConclusionWB-F344caninhibittheactivationofHSC—T6，butithadnoinfluenceonexpressionofECM．[Keywords]Directcocuhure；Activation；Extracellu