耐酸耐热菌的测定(企业内控法).doc

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1、耐酸耐热菌的测定（企业内控法）1、适用范围本方法仅适用于浓缩苹果清汁中耐酸耐热菌的测定。2、设备和材料2．1、广口三角瓶，250mL、1000mL。2．2水浴箱：80℃水浴。2．3、冰箱。2．4、量筒：50mL。2．5、灭菌镊子。2．6、酒精灯。2．7、培养箱：50±1℃。2．8、玻璃铅笔。2．9、溶剂过滤器。2.10、0.45µm滤膜：Ø50mm。2．11、真空泵。2．12、温度计。2．13、培养皿。2．14、高压蒸汽灭菌锅。3、培养基和试剂3．1、K氏培养基3．1．1、组成A：酵母浸膏1.25g蛋白胨2.50g葡萄糖0.5g琼脂7.

2、5g吐温800.5mL将上述各种试剂放入1L的三角瓶中,加入500mL的蒸馏水,在电炉上加热溶解后,在121℃高压灭菌20分钟。3．1．2、组成B：苹果酸1.25g将苹果酸用10mL的蒸馏水溶解,通过一次性无菌注射器和针头式过滤器连接,将苹果酸溶液过滤到已灭菌的培养基中,混匀。3．1．3、平板制作当已酸化的K氏培养基温度降至50℃左右时，将其分装倒入已灭菌的培养皿中，待培养基凝固后，用牛皮纸包扎好，放入冰箱中保存，一般可保存60天。3．2、蒸馏水。4、检验程序：检样适当稀释80℃水浴13分钟无菌水膜过滤检样膜过滤膜放入平板培养基培养50

3、±1℃4天菌落计数报告5、操作步骤5．1、将装有150mL蒸馏水的三角瓶、0.45µm的滤膜、50mL量筒、过滤装置于121℃灭菌15min。5．2、用已灭菌的50mL量筒取待检浓缩果汁50mL，加入已灭菌的盛有150mL灭菌蒸馏水的三角瓶中，混匀。5．3将稀释的样品放入80℃的水浴中，同时放置一个带有温度计的控制样，做为温度控制。观察温度计，待温度升至80℃时开始计时，维持13min，将样品取出并迅速用自来水冷却。5．4、用已灭菌的0.45µm的滤膜及真空抽滤装置过滤热处理后的果汁,移取抽滤装置的上部,将镊子在酒精灯上灭菌后,用镊子将

4、滤膜移置于预先准备好的K氏培养基上,轻敲滤膜几次,使其与滤膜充分接触。同时还必须做空白对照（即用灭菌水代替检样）。注：每过滤一个样品，必须更换一个过滤装置上部的玻璃容器。5．5、将平板翻转放于50±1℃的培养箱中进行4天培养，并在培养箱底部放上盛有蒸馏水的烧杯，以保证培养基的湿度，防止培养基失水变干。6、结果报告记录滤膜上的菌落数，代表每50mL浓缩汁中的嗜酸耐热菌数。