cl-jc-018-2005耐酸耐热菌欧洲检测方法

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1、陕西通达果汁集团中心化验室文件编号：TD/CL-JC-018-2005标题：耐酸耐热菌欧洲检测方法修改状态：页码：1/4版本号：发布日期：耐酸耐热菌欧洲检测方法PDA1、适用范围本方法仅适用于陕西通达果汁集团浓缩苹果清汁中耐酸耐热菌的测定。2、引用方法2.1嘉吉公司检测方法2.2美国库克实验室检测方法3、方法原理对水、果汁、和浓缩果汁进行热处理以激活耐热耐酸菌的孢子，杀死非耐热的微生物，通过膜过滤法将耐热菌分离后，将膜直接放在马铃薯葡萄糖琼脂培养基上培养。4、设备和材料4．1、三角瓶，250mL、

2、1000mL。4．2、水浴锅：80℃水浴。4．3、冰箱。4．4、量筒：50mL、1000mL。4．5、灭菌镊子。4．6、酒精灯。4．7、培养箱：45±1℃。4．8、记号笔。4．9、溶剂过滤器。4.10、0.45µm滤膜：Ø50mm。4．11、真空泵。4．12、温度计。陕西通达果汁集团中心化验室文件编号：TD/CL-JC-018-2005标题：耐酸耐热菌欧洲检测方法修改状态：页码：2/4版本号：发布日期：4．13、培养皿。4．14、高压蒸汽灭菌锅。4.15、一个不锈钢锅（24cm）。4.16、脱脂纱

3、布。5、培养基和试剂5．1、培养基5．1．1、组成A：马铃薯，去皮，切丁300gD-葡萄糖20.0g琼脂粉15.0g配制过程：选择黄色品种的淀粉含量高的马铃薯去皮，削片，称量，加入800ml蒸馏水中，煮沸后保持40min—1h（沸腾后开始计时），用8孔纱布过滤后，加入16克葡萄糖、12克琼脂粉灭菌，然后用10%酒石酸调PH值3.5-3.7.（最好在3.5PH值）这是D板培养方法。5．1．2、组成B：苹果酸1.25g将苹果酸用10mL的蒸馏水溶解,通过一次性无菌注射器和针头式过滤器连接,将苹果酸溶液

4、过滤到已灭菌的培养基中,混匀。K板培养方法用苹果酸5．1．3、平板制作当已酸化的K氏培养基温度降至50℃左右时，将其分装倒入已灭菌的培养皿中，待培养基凝固后，放入冰箱中保存，一般可保存60天。5．2、蒸馏水。6、检验检样适当稀释80℃水浴13分钟陕西通达果汁集团中心化验室文件编号：TD/CL-JC-018-2005标题：耐酸耐热菌欧洲检测方法修改状态：页码：3/4版本号：发布日期：无菌水膜过滤检样膜过滤膜放入平板培养基培养45±1℃菌落计数报告7、操作步骤7．1、将装有150mL蒸馏水的三角瓶、0

5、.45µm的滤膜、50mL量筒、过滤装置于121℃灭菌15min。7．2、用已灭菌的50mL量筒取待检浓缩果汁50mL，加入已灭菌的盛有150mL灭菌蒸馏水的三角瓶中，混匀。7．3将稀释的样品放入80℃的水浴中，同时放置一个带有温度计的控制样，做为温度控制。观察温度计，待温度升至80℃时开始计时，维持13min，将样品取出并迅速用自来水冷却。7．4、用已灭菌的0.45µm的滤膜及真空抽滤装置过滤热处理后的果汁,移取抽滤装置的上部,将镊子在酒精灯上灭菌后,用镊子将滤膜移置于预先准备好的K氏培养基上,

6、轻敲滤膜几次,使其与滤膜充分接触。同时还必须做空白对照（即用灭菌水代替检样）。注：每过滤一个样品，必须更换一个过滤装置上部的玻璃容器。陕西通达果汁集团中心化验室文件编号：TD/CL-JC-018-2005标题：耐酸耐热菌欧洲检测方法修改状态：页码：4/4版本号：发布日期：7．5、将平板翻转放于45±1℃的培养箱中进行4天培养，并在培养箱底部放上盛有蒸馏水的烧杯，以保证培养基的湿度，防止培养基失水变干。8、结果报告记录滤膜上的菌落数，代表每50mL浓缩汁中的嗜酸耐热菌数。