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时间:2020-05-03
《三个猪戊型肝炎病毒ORF2基因连续片段核酸疫苗的构建-论文.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、中国兽医科学2013,43(10):1059—1066ChineseVeterinaryScience中图分类号:S852.659.6文献标志码:A文章编号:1673—4696(2013)10—1059—08三个猪戊型肝炎病毒ORF2基因连续片段核酸疫苗的构建李斌,苏乾莲。,赵武,秦毅斌,梁家幸,肖爱1,2,卢冰霞,李莹莹,何颖。,段群棚。,姜佳佳,梁保忠(1.广西兽医研究所,广西南宁530001;2.广西畜禽疫苗新技术重点实验室,广西南宁530001;3.广西大学动物科学技术学院,广西南宁530
2、005)摘要:为了研制猪戊型肝炎(HE)基因工程疫苗,设计引物扩增猪戊型肝炎病毒(HEV)的基因片段LB1、LB2、LB3,分别与真核表达载体pEASY—M1ExpressionVector直接进行T—A连接,构建得到了重组真核表达质粒pEASY—LB1、pEASY-LB2、pEASY—LB3。将这3个重组真核表达质粒分别转染293T细胞,采用实时荧光定量RT—PCR检测目的基因,并进行SDS—PAGE电泳分析和Western—blot鉴定。结果显示,重组真核表达质粒pEASY—LBI、pEASY
3、—LB2、pEASY—LB3在转染的293T细胞中均可表达一约2O.5ku的目的蛋白,且具有良好的HEV抗原性。本试验获得的3个HEV0RF2连续片段的候选核酸疫苗为今后进一步研制HEV核酸疫苗奠定了基础。关键词:猪;戊型肝炎病毒;ORF2;真核表达质粒;核酸疫苗ConstructionofthreenucleicacidvaccinesofswinehepatitisEvirusORF2genecontinuousfragmentsLIBin一,SUQian—lian,ZHAOWu,QINYi—
4、bin,LIANGJia—xing”,XIAOAi—huan。,LUBing—xia。,LIYing—ying。,HEYing,DUANQun—peng,JIANGJia—jia。,LIANGBao—zhong’。(1.GuangxiVeterinaryResearchInstitute,Nanning530001,China;2.GuangxiKeyLaboratoryofAnimalVaccinesandNewTechnology,Nanning530001,China;3.Collegeof
5、AnimalScienceandTechnology,GuangxiUniversity,Nanning530005,China)Abstract:InordertodevelopswinehepatitisE(HE)geneticallyengineeringvaccines,specificprimersofgenesLB1,LB2,LB3ofswinehepatitisEvirusweredesignedandusedforamplification,DNAampliconsgenerate
6、dbyPCRassays,weredirectlyclonedintoT—AplasmidandexpressedusingpEASY—M1expres—sionvector.ThreerecombinanteukaryoticexpressionplasmidsofpEASY—LB1,pEASY—LB2andpEASY—LB3wereconstructed.TheeukaryoticexpressionplasmidsofpEASY—LB1,pEASY—LB2,pEASY—LB3weretran
7、sfectedinto293Tcells,andthreetargetgenesweredetectedbyreal—timefluorescentquantitativeRT—PCR.TheresuItsconfirmedthatthreeeukaryoticexpressionplasmidsweretransfectedinto293Tcellsandtargetproteinwereexpressed.AnalysisbySDS-PAGEelectrophoresisandWestern—
8、blotanalysisindicatedthatthreetargetproteinswereexpressed293TcellstransfectedbyeukaryoticexpressionplasmidsOf收稿日期:2013—06—14;修回日期:2013—09—22基金项目:广西基本科研业务费专项(桂科专项10—1;桂科专项11—1);广西科技攻关项目(桂科攻10100014—4);广西水产畜牧兽医局科技计划项目(桂渔牧科1204931);广西畜禽疫苗新技术重点实验室
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