家蝇抗菌肽defensin对人肝癌细胞HepG2的增殖、凋亡和周期的影响-论文.pdf

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1、第21卷第2期寄生虫与医学昆虫学报Vo1．21．No．22014年6月ActaParasito1．Med．Entomo1．Sin．Jun．，2014doi：10．3969／j．issn．10055O7．2014．02．005家蝇抗菌肽defensin对人肝癌细胞HepG2的增殖、凋亡和周期的影响木程璨侠焦莉萍赵瑞君原发家杜斌王文建(1．山西省疾病预防控制中心，太原030001；2．山西医科大学基础医学部，寄生虫教研室，太原030001)摘要采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法，分析家蝇抗菌肽defensin对人肝癌细胞HepG2体外生长增殖与凋亡的影响，用倒置光学显微镜检测de

2、fensin对人肝癌细胞HepG2和人正常心肌细胞H9C2生长增殖情况的影响，并采用流式细胞术检测defensin对人肝癌细胞HepG2细胞凋亡及细胞周期的影响。结果显示，家蝇抗菌肽defensin对人肝癌细胞HepG2的生长有抑制作用，对人正常心肌细胞H9C2无抑制作用。通过显微镜观察HepG2细胞凋亡的形态变化，MTT检测发现defensin对肿瘤细胞的增殖抑制率呈剂量反应关系和时间反应关系。defensin能诱导人肝癌细胞HepG2发生凋亡，并且影响人肝癌细胞HepG2的细胞周期。家蝇抗菌肽defensin对人肝癌细胞HepG2具有增殖抑制作用及凋亡作用，对正常人心肌细胞

3、H9C2基本无抑制作用。关键词家蝇；抗菌肽；defensin；增殖；凋亡抗菌肽是昆虫体内重要的先天性免疫分子，正常细胞无毒性。本课题组利用分子生物学方法研究表明抗菌肽具有良好的抗菌作用，免疫调节从家蝇幼虫体内提取抗菌肽defensin并研究其对作用，抗寄生虫、抗肿瘤作用，抗菌肽在杀伤肿人肝癌细胞HepG2肿瘤细胞的作用及对人正常瘤细胞作用的同时对正常人体细胞影响较小心肌细胞H9C2的作用。结果证明家蝇幼虫抗菌(Casteelseta1．，1989)，这是天然抗肿瘤药物的肽defensin对肿瘤细胞有明显的杀伤作用，并发一个重要特点(许玉澄等，1998)。防御素现该抗菌肽defe

4、nsin对肝癌细胞HepG2细胞周期(Defensin)是抗菌肽家族中最大的亚家族，从及细胞凋亡有一定的影响，为天然抗肿瘤药物的哺乳动物、昆虫、植物中分离出来并且充当自然开发提供基础的理论数据。免疫的效应分子，它是机体有效抵抗病原菌感染的第一步(Lieta1．，2012)起到调节机体免疫1材料与方法系统的作用。丘晓燕等(2003)从舍(家)蝇幼虫中提取的抗菌肽类物质能抑制人乳腺癌细胞1．1实验材料MCF．7、人胃癌细胞BGC一823、MCC．803和人肺1．1．1细胞株：人肝癌细胞HepG2和人正常心癌细胞SPC．A．1等人源性肿瘤细胞的体外增殖生肌细胞H9C2均为山西医科大学

5、基础医学院生物长。国内报道的用家蝇幼虫匀浆提取的混合物化学教研室惠赠。(万启惠等，2008；张庆华等，2007；Jineta1．，1．1．2家蝇抗菌肽defensin：防御素defensin从2010)和血淋巴直接冻干粉获得的杂合多肽家蝇体内提取，并经过诱导、表达及纯化制备而(文彩虹等，2004)对SMMC一7721肝癌细胞、成，经抑菌活性鉴定有杀菌效果。A375、K562等肿瘤细胞均有抑制作用，并且对1．1．3材料和试剂：AnnexinV．Fitc—PI细胞凋亡收稿日期：2013—10-12#共同第一作者基金项目：山西省高校科技研究开发项目(200613011)；山西省科技攻

6、关项目(2006031087-04)；太原科学技术发展计划项目(081049)；山西省自然科学基金(2013011060-4)通讯作者，E—mail：4935186aaa2272@sina．con·97·寄生虫与医学昆虫学报第2l卷第2期检测试剂盒，细胞周期检测试剂盒，南京凯基生细胞浓度为(0．5～5．0)×10／mL。在每孔中物科技发展有限公司；DMEM干粉，美国Gibeo加入1O0L的细胞悬液，置于37℃，5％CO公司；RPMI1640培养基，赛默飞世尔生物化学培养箱中培养24h。在其中加入不同浓度的抗菌制品(北京)有限公司；胎牛血清，杭州四季肽defensin培养液100

7、IxL，阴性对照组中加人培青公司；四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)，美国养基，培养5d。每个浓度组每天各取6孔，在Sigma公司。每孔中加入5mg／mL的MTT20IxL，继续培养41．1．4实验设备与仪器：流式细胞仪FACSh后加入200IxL的DMSO，温箱中培养30rain，Calibur，B．DCorp，USA；自动板式酶标仪zS．在450nm处测定吸光度值。根据测定值绘制细2，北京新风机械厂；倒置生物显微镜XDS—IB，胞生长曲线。重庆光电仪器有限公司。高速台式冷冻离心机实验孑L测定A值