DC-CIK细胞对人肝癌HEPG2细胞周期,凋亡的影响

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1、DC-CIK细胞对人肝癌HEPG2细胞周期、凋亡的影响项颖秦波田小利(重庆医科大学附属第一医院感染科重庆400030)摘要目的探讨细胞因子从肝癌患者外周血贴壁单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcells,PBMCs)诱导的树突状细胞（dendriticcells，DCs）与杀伤（cytokineinducedkiller,CIK）细胞对人肝癌HEPG2细胞系周期、凋亡的影响。方法用肝癌患者肝癌组织裂解物（肿瘤抗原）致敏经GM-CSF、TNF-ａ及IL-4等诱导该患者PBMC产生的DCs。用IFN-γ、

2、IL-2和人CD3单克隆抗体（humanCD3monoclonalantibody,hCD3mAb)等诱导该PBMC的悬浮细胞产生CIK细胞。用Tanswell培养小室将DC-CIK细胞与HEPG2细胞在同一培养体系内经该小室膜分隔培养24、48h。流式细胞仪检测该HEPG2细胞的周期；AnnexinV-PI双染法检测其凋亡。RT-PCR、Westernblot分别检测凋亡相关基因Bax及其编码蛋白的表达。结果DC-CIK细胞可明显影响人HEPG2细胞生长周期，两者共培养，可将HEPG2细胞系阻滞于G1期。DC-CIK细胞能显著诱

3、导HEPG2细胞的凋亡(与对照相比，其凋亡诱导率差异显著，P<0.01)。基因与蛋白水平检测表明，DC-CIK细胞可致HEPG2细胞系的凋亡相关基因Bax表达明显上调。结论肝癌患者DC-CIK细胞可明显抑制肝癌HEPG2细胞系的生长，显著诱导该细胞凋亡，且该凋亡诱导具“时间-依赖”与“细胞数量-依赖”特性。关键词DC-CIK细胞肝癌HEPG2细胞细胞周期细胞凋亡TheeffectofCIKcellscombinedwithdendriticcellsofpatientwithlivercanceronthecycleandapop

4、tosisofhumanHEPG2celllineXIANGYingQINBoTIANXiaoli(DepartmentofInfectiousDiseases,TheFirstAffiliatedHospitalofChongqingMedicalUniversity,Chongqing400030,China)Abstract:ObjectiveToexploratetheeffectofcytokineinducedkiller(CIK）cellsanddendriticcells（DCs）fromperipheralblo

5、odmononuclearcell(PBMC)ofpatientwithlivercanceronthecycleandapoptosisofhumanHEPG2celllineoflivercancer.MethodsTheadherentPBMCswereinducedbyGM-CSF、TNF-ａandIL-4inordertoproduceDCs,which9基金项目：重庆市卫生局医学科学技术研究项目(2010-2-301)作者简介：项颖，男，重庆市人，主任医师。主要从事肿瘤发病机制及其治疗方面的研究。E-mail:xian

6、g519@hotmail.com通信作者：秦波，电话：15923261188，E-mail：cqqinbo@126.comweresensitizedwithantigenofautologoustissueoflivercancer.Meanwhile,CIKcellswereobtainedfromthesuspendedPBMCsinducedbyIFN-γ、IL-2andhumanCD3monoclonalantibody（hCD3mAb).TheDCs,CIKcellsandHEPG2celllinewerecultur

7、edinasamecircumstancewithaculturingcabinnamedTranswell，buttheDCs-CIKcellswereculturedatonesideofthemembraneoftheTranswell,HEPG2celllineatanothersideofthesamemembranefor24hand48hrespectively.SubsequentlythecycleofhumanHEPG2celllineculturedwithDCs-CIKcellsof24hand48hwer

8、etestedthroughflowcytometry(fcm)respectively.TheAnnexinV-PIstainingwasemployedtoanalysistheapoptosisofthesamecellline,andthe