柴胡皂甙d对人肝癌hepg2细胞增殖及细胞周期的影响

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1、柴胡皂甙d对人肝癌HepG2细胞增殖及细胞周期的影响：张国平，祝葆华，王兰天，童传明，敬敏【摘要】目的探讨柴胡皂甙d（SSd）对人肝癌HepG2细胞增殖和细胞周期的影响。方法(1)常规培养人肝癌HepG2细胞；(2)噻唑蓝（MTT）实验观察不同质量浓度SSd处理HepG2细胞72h后以及10mg/L的SSd作用HepG2细胞不同时间对HepG2细胞生长指数的影响；(3)流式细胞术（FCM）检测SSd处理HepG2细胞48h后细胞周期的分布。结果SSd能明显抑制HepG2细胞的增殖，以10mg/L的SSd作用48h的抑制作用最明显。FC

2、M检测显示SSd作用48h后实验组处于S期的细胞数较对照组明显减少（P<0.01）。结论SSd对人肝癌HepG2细胞的体外增殖具有抑制作用,并能使细胞周期中处于S期的细胞数减少。【关键词】柴胡皂甙d;HepG2;增殖；细胞周期Abstract:ObjectiveTostudytheeffectsofsaikosaponinsd(SSd)onproliferationandcellcycleinthehumanhepatocellularcarcinomacellline,HepG2cellline.MethodsHepG2ce

3、llseasuredbymonotetrazdium（MTT）assayandthecellcycleinedbythefloetry(FCM)analysis.ResultsTheSSdobviouslyinhibitedtheproliferationofHepG2celllineinaconcentrationandtimedependentmanner,themaximumresponseofthecellstoSSdg/Landthetreatmenttimepointof48h.paredg/LSSdfor48hsigni

4、ficantlyreducecellnumbersinSphase(P<0.01).ConclusionTheSSdcouldinhibittheproliferationofHepG2celllineandarrestitscellcycleinSphase.Key1640,GIBICO,USA)；新生牛血清（杭州四季青生物材料工程公司）；胰蛋白酶(美国Gibco公司)；96孔细胞培养板(Corning公司)；四甲基偶氮唑蓝（MTT）（北京华美生物工程公司）；碘化丙啶（PI）染色液（南京凯基生物公司）；HepG2细胞由广东医学院

5、天然药物研究与开发重点实验室长期冻存；超净工作台；CO2孵箱；倒置相差显微镜；酶标仪(ELX800,USA)；流式细胞仪（EPICSXLCoulter,USA）。1.2方法　　1.2.1HepG2细胞的培养　　HepG2细胞于含体积分数10%小牛血清,100U/mL青链霉素的RPMI1640中,放置于37℃、体积分数为5%、饱和湿度的CO2孵箱中培养,每两天传代一次。取对数生长期的细胞用于实验。　　1.2.2SSd溶液的配制　　电子天平称取SSd粉末10mg加入200μLDMSO溶解,用无血清RPMI1640培养液定容为25mL得

6、SSd溶液质量浓度为400mg/L。0.22μm过滤除菌,用无血清RPMI1640培养液分别稀释为200、100、50、25mg/L4种质量浓度,4℃保存备用。　　1.2.3四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测SSd对细胞增殖的影响　　制备细胞悬液并调整细胞浓度为4×104/mL,接种于96孔板,每孔100μL（4000个细胞）。培养箱内培养过夜后随机分为4组。分别加入含SSd终质量浓度为20、10、5、2.5的培养液200μL，并设加等体积RPMI1640培养液的阴性对照组,每组5个复孔。分别作用24、48、72h后每孔加入新鲜配制

7、的0.5%MTT储存液20μL/孔,继续培养4h,弃上清后每孔加入DMSO150μL,低速震荡10min以溶解细胞内结晶。酶标仪检测各孔570nm处吸光值,按如下公式计算抑制率。抑制率=(对照组A值实验组A值)/对照组A值×100%。　　1.2.4FCM检测SSd对细胞周期的影响　　取对数生长期的HepG2细胞传代,培养箱内培养过夜,将HepG2细胞的培养液换为含10mg/L的SSd溶液,继续培养48h。0.25%胰蛋白酶溶液消化细胞,制备细胞悬液,1000r/min离心8min,冷PBS洗两次,70%预冷乙醇固定,4℃保存过夜。上机

8、前离心去除乙醇,冷PBS洗两次,加入50mg/L的PI染料1mL,4℃闭关染色30min。400目尼龙网过滤后FCM检测细胞周期分布。　　1.3统计学处理实验数据以(±s)表示,采用统计学软件SPSS13.