sd118-2对人hepg2细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期影响及其作用机制

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1、第二军医大学硕士学位论文SD118--2对人HepG2细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期影响及其作用机制姓名：戴焱焱申请学位级别：硕士专业：儿科学指导教师：陈若华201205SDll8—2对人HepG2细胞增殖、细凋亡、细胞周期影响及机制探讨摘要研究背景：肝细胞癌(HCC)，是全球癌症死亡的主要肿瘤之一，也是肝硬化患者的主要死因。HCC的发病率近年来不断增加，每年有50万一100万新增患者【l】。HCC的早期诊断及有效治疗对延长肝细胞癌患者生存时间起到重要的作用。肝移植及肝脏外科切除术是目前最常用的治疗方法，但是由于肝源的缺少及术后

2、高复发率致使这些治疗方法在临床上没有取得显著疗效，也增加了患者的痛苦及经济负担。化疗是目前对于不适应外科手术病人的辅助治疗方法之一，然而化疗的临床治疗效果不是很显著。例如，阿柔比星是临床治疗肝癌的标准药物，对身体具有很大的副作用，在延长生存时间方面也没有显著的疗效【21。近半个世纪以来，人们一直致力于自天然植物中提取药物用于临床癌症的治疗，并证实其临床效果较显著。化合物SDll8粗提自中国南海深海处藻类等沉积物中，其经过提纯后分为15种成分，成分I(青黄霉素X)即为SDll8．2。研究证实SDll8．2对人MCF．7、H印G2

3、、NCI．H460、HeLa等细胞的活性具有抑制作用，其中对人H印G2细胞的细胞毒性更显著【31。研究目的：观察化合物SDll8．2对人H印G2细胞增殖、细胞凋亡及细胞周期的影响。研究化合物SDll8．2诱导细胞凋亡的作用机制。研究方法：取对数生长期人H印G2细胞，分为实验组和对照组。实验组给予7p咖LSDll8—2作用于人H印G2细胞，对照组给予O．7％DMSo处理。化合物SDll8．2的IC50是7p咖L。1、采用MTT法检测SDll8．2对正常人肝脏细胞、人H印G2细胞增殖影响：7pg／mL化合物SDl18．2分别作用于

4、人正常肝脏细胞、人H印G2细胞48h后通过酶标仪570姗波长测每孔的吸光度值。细胞增殖率=(实验组吸光度均值)／(对照组吸光度均值)×100％。第二军医大学硕士学位论文2、采用DAPI荧光染色法观察化合物SDll8．2处理后细胞形态的变化：7pg／mLSDll8．2分别作用于人H印G2细胞12h、24h、48h后DAPI染色，通过荧光显微镜激发观察人H印G2细胞不同时间段形态变化。3、检测细胞凋亡率：7p咖LSDll8—2分别作用于人HepG2细胞12h、24h、48h，通过流式细胞仪加mexinV．FITC／PI双标法检测化

5、合物SDll8．2诱导人H印G2细胞凋亡率。4、检测细胞周期阻滞：7“g／mLSDll8-2分别作用于人H印G2细胞12h、24h、48h，通过流式细胞仪检测化合物SDll8—2引起人HepG2细胞周期阻滞。5、采用JC．1染色法检测细胞线粒体膜电位(△甲m)水平：7p∥mLSDll8．2分别作用于人H印G2细胞12h、24h、48h，使用JC．1染色，通过流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位的变化。6、WestemBlot检测凋亡相关蛋白Bcl一2、Bax、PAI冲、C．P舢心表达变化：7pg／mLSDll8．2分别作用于人H印G

6、2细胞12h、24h、48h，收集细胞、提取蛋白，通过WestenlB10t检测化合物作用于人H印G2细胞后凋亡相关蛋白的变化。研究结果：化合物SDll8-2呈时间依赖性改变人H印G2细胞形态、抑制细胞的生长、降低细胞线粒体膜电位、诱导细胞凋亡、细胞G2期阻滞；抗凋亡蛋白Bcl．2表达呈时间依赖性减少，促凋亡蛋白Ba】【、C．PAl冲表达呈时间依赖性增加：化合物SDll8—2对正常肝细胞增殖无显著影响。研究结论：化合物SDll8—2可选择性影响人肝癌H印G2细胞增殖，但对人正常肝细胞影响不显著；可通过细胞G2期阻滞和诱导细胞凋

7、亡抑制人H印G2细胞增殖，并通过下调Bcl．2蛋白表达、上调Ba)【、C—PAl冲蛋白表达诱导细胞凋亡。化合物SDll8—2具有诱导肿瘤细胞凋亡的作用，并能使细胞周期进程发生变化。关键词：sDll8．2，HepG2细胞，细胞凋亡，细胞周期，线粒体膜电位，Bcl．2，Bax'PARP．C-PARPSDll8—2对人HepG2细胞增殖，细凋亡、细胞周期影响及机制探讨ResearchBacl噜round：AbstractH印patocellularcarcinoma(HCC)，isoneoftheprimaD，nunordeaths

8、intlleworld，趾dalsooneofthemaincauseofdeatllinpatientswitll1ivercimlosis．Theincid∞ceofHCCincrc嬲edcontinuouslyinrecentyears，thereare500000to