人参皂苷单体Rh2对人鼻咽癌CNE2细胞株增殖、凋亡的影响及其机制-论文.pdf

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1、中国生物制品学杂志2014年8月第27卷第8期ChinJBiologicalsAugust2014．Vo1．27No．8·1029·治疗性制剂人参皂苷单体Rh2对人鼻咽癌CNE2细胞株增殖、凋亡的影响及其机制袁轲，刘泽洪，游智梅z．一，夏菁z，一，魏强一，赵亮z一，李静z，1．重庆医科大学附属儿童医院耳鼻喉科，重庆400014；2．重庆医科大学组织学与胚胎学教研室，重庆400016；3．重庆医科大学干细胞与组织工程研究室，重庆400016摘要：目的研究人参皂苷单体Rh2对人鼻咽癌CNE2细胞株增殖、凋亡的影响及其可能的机制。方

2、法取对数生长期的CNE2细胞，用不同浓度的Rh2(20、40、60、80、100txmol／L)处理不同时间(24、48、72h)，并设对照组(正常培养)，采用M1TI’法检测各组细胞的增殖活力；用最适作用浓度的Rh2分别处理CNE2细胞24、48、72h，采用Hoechst荧光染色法观察细胞凋亡形态；流式细胞术检测细胞凋亡率、周期分布以及膜电位的变化；Westernblot法检测细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase一3、CyclinD1、P53的表达水平。结果Rh2对CNE2细胞的增殖具有明显的抑制作用，且呈时

3、间和剂量依赖性，60txmol／LRh2作用72h为最适作用浓度和时间。经60wmol／L的Rh2作用48、72h后，凋亡细胞数目增多，凋亡细胞体积变小，细胞核出现染色质不均匀，核浓缩聚集、碎裂，边集程度增大等现象。与对照组比较，经60Ixmol／L的Rh2作用24、48、72h，CNE2细胞的凋亡率逐渐增~Jl(P<0．01)；G0／G。期细胞比例逐渐升高(P<0．01)，s期(P<0．01)和G／M期细胞比例逐渐下降；细胞的膜电位逐渐降低(P<0．05)；促凋亡蛋白Bax、激活型Caspase一3和P53蛋白表达上调(P<

4、0．05)，抗凋亡蛋白Bcl一2和细胞周期相关蛋白CyclinD1表达下调(P<0．05)。结论人参皂苷单体Rh2具有抑制CNE2细胞增殖，使细胞周期阻滞在G。／G期，诱导细胞凋亡的作用，其机制可能是通过Caspase／CyclinD1信号通路实现的。关键词：人参皂苷；Rh2；鼻咽癌；CNE2细胞；细胞增殖；细胞凋亡；Caspase．3；CyclinD1中图分类号：R739．63文献标识码：A文章编号：1004—5503(2014)08．1029-06Effect0fginsenosideRh2onproliferationa

5、ndapoptosisofhumannasOpharyngealcarcinoma-2cellstrainandrelevantmechanismYUANKe’，LIUZe-hong，YOUZhi—mei，XIAJing，WEIQiang，ZHAOLiang，LIJing"DepartmentofOtolaryngology，ChongqingChildrensHospital，Chongqing400014，ChinaCorrespondingauthor：LIJing，E-mail：lo'ingyangyang@126．c

6、omAbstract：ObjectiveToinvestigatetheeffectofginsenosideRh2onproliferationandapoptosisofhumannasopharyngealcarcinomaCNE2cellstrainaswellastherelevantmechanisnrMethodsCNE2cellsatlogarithmicphaseweretreatedwithRh2atvariousconcentrations(20，40，60，8Oand100p~mol／L)forvOUS

7、(24，48and72)hours。usingthoseinroutinecultureascontrol，anddeterminedforproliferativeactivitybyMTFassay．CNE2cellsweretreatedwithRh2attheoptimalconcentrationfor24，48and72hrespectively，thenobservedforapoptoticmorphologybyHoechststaining，observedforapoptoticrate，distribu

8、tionofcellcyclesandchangeofmembranepotentialbyflowcytometry，anddeterminedbyexpressionsofBax，Bcl-2，Caspase-3，CyclinD1andp53proteinsbyWester