miR-31对人皮肤鳞状细胞癌生长的影响及作用机制的研究-论文.pdf

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1、墨±!查笙!塑hin』linOncol2014，Vo1．41，No．9www．cjco．an555miR一31对人皮肤鳞状细胞癌生长的影响及作用机制的研究陈凯常东方段绍坤李渝凉摘要目的：探讨miR一31对皮肤鳞状细胞癌(鳞癌)生长的影响及作用机制。方法：在鳞癌细胞中转染miR一31的2"-羟基甲基化的反义寡核苷酸(antisenseoligonueleotide，ASO)，运用平板克隆形成和体外成瘤实验检测miR一31对鳞癌生长的影响。运用Westernblot印迹及GFP报告基因实验验证miR一31的靶基因。在鳞癌细胞中转染靶基因的siRNA，检测其对细胞生长的影响。最后，运用实时定量

2、PCR以及免疫组织化学检测miR一31和靶基因在鳞癌组织中的水平。结果：转染miR一31反义寡核苷酸(miR一31ASO)可以抑制克隆数目及体内裸鼠肿瘤体积(P<0．05)。LATS2(1argetumorsuppressorhomolog2)是miR一31的直接靶基因。抑制LATS2表达后，鳞癌细胞克隆数目增加(P<0．05)。miR一31在鳞癌中高表达，与LATS2的表达呈负相关。免疫组织化学结果也显示LATS2在鳞癌组织中低表达。结论：miR一31通过负调控LATS2抑制鳞癌的生长。因此，miR一31具有作为鳞癌分子治疗靶标的潜能。关键词微小RNA鳞状细胞癌荧光定量PCRdoi：1

3、0．3969／j．issn．1000—8179．20131787RolesandregulationmechanismofmiR．31inhumancutaneoussquamouscellcarcinomagrowthKaiCHEN，DongfangCHANG，ShaokunDUAN，YuliangLICorrespondenceto：KaiCHEN；E—mail：chenkai01213@163．cornDepartmentofBurnsandPlasticSurgery,theAfiliatedYongchuanHospitalofChongqingMedicalUniversit

4、y,Chongqing402160，China．AbstractOblective：ToinvestigatetherolesandregulationmechanismofmiR-31inhumancutaneoussquamouscellcarcino--ma(cSCC)growth．Methods：cSCCcellsweretransfectedwiththeantisenseoligonucleotide(ASO)ofmiR-31，andthecSCCgrowthwastestedbycolonyformationandinvivotumorformationassays．The

5、targetgeneofmiR一31wasvalidatedbyWesternblotandgreenfluorescentprotein(GFP)reporterassay．ThecellswerethentransfectedwiththesiRNAofthetargetgene，andtheefectofthetargetgeneoncellgrowthwaspreformedbycolonyformationassay．Finally,real-·timePCRandimmunohistochemistrywereusedforanaly-．sisoftheexpressiono

6、fmiR一31anditstargetgene．Results：miR．31ASOresultedinalownumberofeellcoloniesandsmalltumorvol—umefP<0．05)．WesternblotshowedthatthecellswithmiR一31ASOhadahigherproteinleveloflargetumorsuppressorhomolog2(LATS2)thanthecontro1．The3’UTRofLATS2hadabindingsitewithmiR一31，andmiR-31ASOincreasedtheGFPintensity

7、con—trolledbyLATS23’UTR，whereasnoefectwasobservedonthemutantLATS23’UTR．WestemblotshowedthatLATS2siRNAinhib—itedtheexpressionofLATS2proteinbyabout80％．KnockingdownofLATS2increasedthecolonynumberbyabout70％or1．3一foldincSCC