基因药物载体中壳聚糖作为细胞支架材料的初步研究-论文.pdf

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1、：!兰：ChineseJournalofMedicinalGuide20I3Volume15NO．9(Seria1NO．1I9)基因药物载体中壳聚糖作为细胞支架材料的初步研究吕永铭冀晓庆杨金荣，张慧娟(人}人【I院约’，人300I21)壳聚糖是·f4,4P~6IF电荷的碱性多糖，来源广泛，价格1．2．2吸水率及孔隙率的测定取质鼍为Wa(6J冻f史架置低廉，兼彳丁牛物_牛}{容性和可降解性，已经作为基冈、药物的于蒸馏水中24h，吸1：表而的水分，称翳-qKWb，吸水率为(Wa-载体，卜物领域普遍使Jfl⋯，随着组织：[程

2、的发展，体外人Wb)／Wa。培养tJ-,一zLI~n官对人体损害的器官进行修复的技术越来越成采用液体置换法测定支架空隙率。用游标尺测量壳熟，体外组织器官的培养需要生物降解性比较好的载体，壳聚聚糖支架表观体积天平称量支架干质量11，将支架吸满无糖符合达条件，因此壳聚糖支架成为了研究的热点，本实验水乙醇后，用滤纸吸去表面多余的液体，称质最为Q，无水乙采用海潦酸钠、明胶和肝素对壳聚糖支架进行修饰，对这些醇密度P，则支架空隙牢为Jp=(Q—m)×V／P’。支架的扎隙牢干¨水牢进行分析，并且将肝细胞种植干支架1．2-3原代肝细胞

3、培养取成年天津军事医学科学院小鼠，观察qq．1V,jG~饰的芰架对肝细胞贴壁和增殖的影响。脱颈椎处死，取出肝脏，用胰酶消化，接利f培养瓶巾，lj=l材料和方法37℃，95％的O，5％C01培养箱中培养。待细胞长到(70～80)％I．1材料融合，用胰酶进行消化，接种于无菌的支架I，干培养箱【{J继壳聚糖(浙江，物科技有限公司，产批续培养，以后每24hq"-最更换培养液。I1．2-4细胞贴壁率测定将l05个肝细胞按利t1支架L，f培养lr7J1‘：200603200)，叫胶(J海铭睿生物科技有限公司，生产批~,J：P707

4、97)，海藻酸钠(菏岛明川海藻集团有限公司，牛产批箱中培养6h后，用PBS将没贴姥的细胞洗掉，加入培养基后，‘：9005—38—3)，素钠(人津乍物化学制药有限公司，生产批每：fL]／ll(50mg／m1)MTT溶液lOOul，培养4h)~-’力I1150ulDMSO，号‘：20120707，药准字：Hl2020505)，MTT(北京索莱宝科技充分震荡之后，使用分光光度计测定OD4901't91"I~[，各组均设有限公)，DMEM培养液(GIBCO)，胎牛清(Hyclone)，胰哺空白对照。(Gibco，笑罔)，其它试

5、剂均为罔产的分析纯试剂。1．2．5细胞增殖的检测取l0个细胞按种于964L板支架上，1．2方法在细胞培养箱中培养，7天后每4LDa入MTTt~液l00ul，培养1．2．1多孔壳聚精支架(I0,N备取0．06ml3M的壳聚糖溶液4h后，加150ulDMSO，充分震荡之后，使用分光光度tt-N定氍_f964L板每扎Ifl，一70冰箱过夜，次日使用冷冻干燥机至fOD490的值，各组均设空白对照。考察细胞不同的阴离子燥为l每D,0．25mi0．5M的NaOH，中和多余的醋酸，孵育修饰的支架的增殖速度‘。20rain，川PBS洗

6、至Ffl1J陛，再次冻f即可以得到壳聚糖支架。1．3统计分析分别往先聚糖支架每4L)JIJ0．25ml0．1％的海藻酸钠、0．5％的本实验的所有数据通过SPSSI5．0进行分析，数据通过(HJ】胶币¨0．5％的Hf索钠挪育24h洱冻1二即可成为经过不同修4s)表示，组间比较通过T检验，P

7、i15卷9期(总第119期)2结果架经过l％海藻酸钠、0．5％的明胶和0．5％l'lgJlf柰钠f1．i．illJ，2．1书究制备的壳聚糖支架的孔隙率和吸水半分圳为明的增加了壳聚糖支架A94L隙率和吸水半(，J<0．01)，(78．5t8．2)％和(95．8}8．7)％，经过海藻酸钠、明胶干¨fJr素修具仃统汁学意义。有研究示孔隙率和吸水丰埘J胞的饰J史fl"J4L隙牢l币u吸水率明显提高，P<0．01，具仃统生长具仃很重要的作用，孔隙率和吸水牢的{址一J‘以增细汁。意义(1)。胞的生长空间，由r气和养分的供给，使f!

8、}胞JL-'fi‘虹『JIJ表I不同材料修饰的壳聚糖支架的子L隙率和吸水率比较充分的空间和营养进行生长。影响细胞贴壁的因素主要有细胞本身的素材T}09因素，细胞本身的因素主要是指细胞膜的成顷等h素，如所带电荷、细胞膜与材料接触的时I'fiJ、细胞~1'19疏水性、细胞膜的分子运动等，材料凶素主址材~'l-l'19ill和性质，粗糙