僵蚕HPCE指纹图谱研究.pdf

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1、辽宁中医杂志2012年第39卷第1期·1·僵蚕HPCE指纹图谱研究李峰，沈红薇，王成芳，包永睿(1．辽宁中医药大学药学院，辽宁大连116600；2．辽河油田第二职工医院，辽宁盘锦124010)摘要：目的：建立僵蚕的HPCE指纹图谱分析方法，并比较其生品、制品的区别。方法：未涂层石英毛细管柱(50em×65~xm，有效长度55em)，以30mmo]／L硼砂一0．2mol／L硼酸(pH8．6)为缓冲液，分离电压18kV，柱温25℃，检测波长245nm，测定不同规格10批僵蚕商品药材的HPCE图谱，20rain内完全分离。结果：建立僵蚕的HPCE指纹图谱，共有8个共有峰，通过与共有模式比较，1

2、0批僵蚕药材的相似度在0．959～0．997；方法学考察达到标准。结论：10批僵蚕两种商品规格具有相似性，炮制品间的差异较生品间的稍大；该方法具有良好的精密度和分离效果，可作为僵蚕品种鉴定与质量控制方法。关键词：僵蚕；高效毛细管电泳；指纹图谱中图分类号：R284文献标识码：A文章编号：1000—1719(2012)01—0001—03僵蚕(BombyxBatryticatus)为蚕蛾科昆虫家蚕18kV，柱温25℃，检测波长245nm，压力进样：30BombyxmoriLinnaeus4～5龄的幼虫感染(或人工接mbar×3s；进样前，毛细管分别以1mol／LNaOH、水冲种)白僵菌Bea

3、uveriabassiana(Bals．)Vuillant而致死洗5min，以缓冲液冲洗lOmin，静止平衡2min；分析时的干燥体⋯。因具有息风止痉，祛风止痛，化痰散结的间30rain。功效，多用于肝风夹痰，惊痫抽搐，小L急惊，破伤风，表l僵蚕商品药材来源及规格中风口，风热头痛，目赤咽痛，风疹瘙痒，发颐痄腮等疾病。僵蚕商品药材中有生品、制品之分，为有效鉴别僵蚕商品药材，本实验采用高效毛细管电泳法(HPCE)，对不同地区的10批僵蚕药材商品进行指纹图谱研究，以期为僵蚕商品药材的鉴定提供实验依据。1仪器与试药1．1仪器美国Agilent3D毛细管电泳仪，DAD检测器，Agi—lent化学工

4、作站。未涂层石英毛细管柱(50m×65am，有效长度55cm，郑州英诺高科有限公司)；AS5150A超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；TDL一5一A离心机；PHS一25型pH计(上海盛磁仪器有限公司)；AR2140电子分析天平(METTLE公司)。1．2实验材料僵蚕药材为购于不同地区的商品药材，经康庭国2．3方法学考察教授鉴定，详见表1。23．1精密度试验取3供试品溶液，连续进样52方法与结果次，各共有指纹峰的相对保留时间RSD≤3．4％，各共2．1供试品溶液的制备有指纹峰相对峰面积RSD≤4．O％，表明仪器精密度良分别称取50~C恒温干燥的各僵蚕样品粉末0．5g好。(过100目筛

5、)，置具塞三角瓶中，加lOmL水，超声2．3．2重复性试验取3样品，按供试品制备方法，30rain，离心20min(3000r／min)，取上清液过0．45}xm平行制备供试品溶液5份，进行电泳图测定，各共有指微孔滤膜作为供试品溶液。纹峰的相对保留时间RSD≤3．8％，各共有指纹峰相对2．2毛细管电泳条件峰面积的RSD≤4．7％，表明方法重复性良好。毛细管柱(55cmX5Om)；以30mmol／L硼砂一2．3．3稳定性试验取3供试品溶液于0、2、4、8、0．2mol／L硼酸(pH8．6)为运行缓冲溶液；分离电压1O、24h进样分析，色谱图中各共有峰的相对保留时间RSD≤1．2％，各共有峰

6、相对峰面积的RSD≤4．3％，收稿日期：2011—06—05说明样品在24h内稳定。基金项目：辽宁省教育厅(20060547)；沈阳市科技局(1081238—1—2．4指纹图谱的测定与计算相似度00)。将各供试品溶液，按“2．2”电泳条件进行测试，得作者简介：李峰(1963一)，女，教授，博士研究生导师，博士，研究方向：到样品的电泳图谱。将所得电泳图谱分别导入国家药中药材品质评价教学、科研。·2·辽宁中医杂志2012年第39卷第1期典委员会推荐的“中药色谱指纹图谱相似度评价系统共有峰(编号为1、2、3、4、S、5、6、7)，作为构建指纹图(2004A、B)”软件，得到僵蚕HPCE指纹图谱

7、共有模式谱的特征峰；各样品的相对保留时间和相对峰面积构如图1，并生成僵蚕对照指纹图谱R见图2，以及相应成了其指纹图谱特征，结果见表4、5；为比较僵蚕生品的峰位和峰面积(见表2)；相似度计算结果，1O批僵与制品的差异性，又分别对其生品与制品指纹图谱共蚕药材与对照指纹图谱的相似度见表3；选取的8个有峰相对峰面积的RSD进行了比较，见表6～7。表5僵蚕HPCE指纹图谱共有峰的相对峰面积共有峰编号样品编号1234S5673．627．25lO