QExactive四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱系统对丹皮酚经大鼠肝微粒体体外代谢产物的分析.pdf

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1、第41卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第7期2013年7月ChineseJournalofAnalyticalChemistry1074～1079D0I．10．3724／SP．J．1096．2013．20976QExactive四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱系统对丹皮酚经大鼠肝微粒体体外代谢产物的分析郭延垒吴明军李文娟江峥叶芳挺于超(重庆医科大学生命科学研究院，重庆400016)(赛默飞世尔科技上海示范中心，上海201206)摘要以丹皮酚和2，4-二羟基苯乙酮为研究对象，采用QExactive四极杆一静电场轨

2、道阱高分辨质谱系统，及内置有I相和Ⅱ相代谢途径分析的MetWorks代尉物鉴定软件，系统分析丹皮酚经肝微粒体代谢的I相代谢及其I相代埘产物2，4-二羟基苯乙酮经微粒体代谢的Ⅱ相代谢产物。结果表明，丹皮酚在大鼠肝微粒体中经I相代谢后产物主要为4位去甲基化的2，4-二羟基苯乙酮和1位相邻羰基的脱甲基化的2一羟基4．甲氧基苯甲醛以及5位的羟基化代谢产物2，5-二羟基4．甲氧基苯乙酮，而2，4一二羟基苯乙酮的Ⅱ相代谢产物主要为4位葡萄糖醛酸化的糖苷化代谢产物2一羟基4'-O一葡萄糖醛酸苯乙酮。关键词丹皮酚；2，4-二羟基苯乙酮；

3、大鼠肝微粒体；QExactive四极杆一静电场轨道阱高分辨质谱系统1引言随着药物代谢研究的不断深入，具有高分辨率、高灵敏度、高采集速度等特点的质谱系统在药物代谢研究中的应用不断扩展¨-zJ，因此越来越多的小分子代{身产物被发现。由于具有药理活性的小分子代谢产物在早期ADME(药物吸收、分布、代谢和排泄)过程中同样发挥重要作用，因此受到广泛关注。丹皮酚(Paeonol，Pae)，又称牡丹酚，主要是从萝摩科植物徐长卿Cynanchumpaniculatum(Bunge)Kitagawa干燥根或全草和毛茛科芍药属植物牡丹Pae

4、oniasufruticosaAndr．、芍药P．1actifloraPall的根皮中提取分离出来的一种小分子酚类化合物，呈白色针状结晶，其分子量为166．17，化学名称为2一羟基一4．甲氧基．苯乙酮。该活性物质具有抗菌、消炎、抗动脉粥样硬化、增强细胞免疫等广泛的药理活性l3J。研究表明，丹皮酚在体内及体外有多种代谢产物，且多为I相代谢产物J，其中最主要的是2，4一二羟基苯乙酮(Resacetophenone，Res)。在体内它主要是由CYP1A2催化的在丹皮酚4位去甲基的氧化反应产物。但是，对于作为重要I相代谢中间体的

5、2，4．二羟基苯乙酮是否存在Ⅱ相代谢途径的研究却鲜有报道。本实验采用先进的QExactive四极杆一静电场轨道阱高分辨质谱系统J，对丹皮酚经鼠肝微粒体P450酶系(CYPs)的I相代谢，以及2，4．二羟基苯乙酮经UGTs的Ⅱ相代谢产物进行了系统分析，并根据一级和二级高分辨质谱数据对可能的代谢产物进行鉴定。同时借助MetWorks代谢鉴定软件内置的I相和Ⅱ相代谢途径分析功能，对QExactive采集的高分辨质谱数据进行进一步分析，根据精确质量数、同位素分布、二级质谱图相关性等对可能的代谢物进行定性分析，极大地简化了数据处理

6、流程。通过分析确定了丹皮酚的代谢中间体在体外经肝微粒体的Ⅱ相代谢途径，并发现了一些新的代谢产物，为丹皮酚体外代谢的进一步研究以及临床合理化用药提供新的实验依据。2实验部分2．1仪器与试剂ThermoScientificQExactive四极杆一静电场轨道阱高分辨质谱系统，ThermoAccela600快速液相色谱系统，MetWorks代谢产物软件分析系统(美国ThemloFisher公司)；R21G型高速冷冻离心机(日本日立公司)；Elixl0超纯水净化系统(美国Millipoer公司)；组织匀浆机(德国IKA公司)；X

7、S一105十万分之2012-09—26收稿；2013-03．27接受本文系国家科技重大专项(No．2010ZX09401—306—1．1)和重庆科技创新能力建设项目(No．CSTC，2010AA5058)资助E-mail：yuchaom@163．com第7期郭延垒等：QExactive四极杆一静电场轨道阱高分辨质谱系统对丹皮酚经大鼠肝微粒体体外代谢产物的分析一精密电子天平(瑞士MettlerToledo公司)。丹皮酚(Paeonol，Sigma．Aldrich公司，批号H35803)，2，4一二羟基苯乙酮(Resacet

8、ophenone，阿拉丁公司，批号1104181)，小牛血清蛋白(AlbuminBovineV，Roche公司，批号020100106528)，CYP1A2(P4501A2，BD公司，批号68375)，D-葡萄糖一6一磷酸(D—glucose-6一phosphatesolution，Sigma—Aldrich公司，批