一种基于HRM技术的快速DNA甲基化检测方法.pdf

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1、1336中吲卫生检验杂志2012年6月第22卷第6期ChineseJournalofHealthLaboratoryTechnology，Jun2012：Vol22No6【临床检验】一种基于HRM技术的快速DNA甲基化检测方法胡笑蓉，毛雄英，王卫华。，陈辉(1．宁波大学医学院，浙江宁波315211；2．浙江省宁波市医学科学研究所，浙江宁波315020；3．宁波大学医学院附属医院检验科，浙江宁波315020)[摘要]目的：建立经济可靠的基于MS—HRM技术的检测DNA甲基化的方法。方法：采用简单的沉淀法纯化回收Bis—DNA(重亚硫

2、酸钠处理后的DNA)，首次采用picogreen为MS—HRM分析染料，并用新建立的方法检测结直肠癌患者组织SEP／9启动子甲基化水平。结果：新方法的回收率在63％以上，纯度、得率都显著优于经典方法中的PromegaWizardDNAClean—upSystem，Picogreen染料可检测到低至0．5％甲基化。共检测34例结直肠癌组织，其中SEP／9异常甲基化的组织33例，占97％，检出率高于文献报导。结论：本文建立的方法简单快速、灵敏度高、重复性好、经济、可操作性强的优点。[关键词]甲基化；纯化；甲基化特异性高分辨率熔解曲线[

3、中图分类号]R730．4[文献标识码]B[文章编号]1004—8685(2012)06—1336—03AnovelandreliablemethodofDNAmethylationanalysisbasedonHRMtechnologyHUXiao—rong，MAOXiong—ying，WANGWei—hua。，CHENHui(1．MedicalSchoolofNingboUniversity，Ningbo，ZhejiangProvince，315211，China；2．NingboInstituteofMedi—calScien

4、ces，Ningbo，ZhejiangProvince，315020，China；3．ClinicalLaboratory，theAffiliatedHospitalofMedicalSchoolofNingboUniversity，Ningbo，ZhejiangProvince，315020，China)IAbstractlobjective：．r0establishareliableandeconomicmethodofDNAmethylationanalysisbasedontheHighResolutionMelting．

5、Methods：AnovelBis—DNA(bisulfitetreatedDNA)pufificaionmethodwasestablishedbyusingethano1．PicogreenwasusedastheMS—HRMdyeintheanalysis．Toverifythemethod．methylationofsEP／9promotorofcolorectaltumortissuewasanalyzed．ResultsTherecoveryofDNApurificationfollowingbisul—ritetre

6、atmentbythenewmethodwasmorethan63％。whichwasmuchbetterthanPromegaWizardDNAClean—upSystem．ThesensitivityofHRMusingPicogreendyewasashighas0．5％．Abnormalmeth~lationofSEP7_9promo—torwasobservedin97％ofcolorectaltissuesamples(33／34)．thedetectionratewashigherthanreported．Concl

7、u-sion：ThenewmethodcanbeappliedtoanalyzeDNAmethylation，anditiSareliableandeconomicmethod．[Keywords]Methylation；Purification；MethylationsensitivehighresolutionmeltingcurveanalysisDNA甲基化是哺乳动物基因组DNA后天修饰的最曲线)是近年发展起来的高灵敏度的DNA突变检测技常见途径，在维持染色体结构、抑制x染色体活性、肿瘤术。两者结合被称为MS—HRM，是一

8、个高灵敏度，高通的发生和发展都起重要的作用⋯。特定基因启动子甲量的DNA甲基化检测技术。本文报道了一种简单的纯基化异常是引起肿瘤的重要原因之一，以DNA甲基化化Bis—DNA的方法，并且首次将Picogreen作为MS—作为肿瘤标志物已经引起人们的