产剑麻皂苷水解酶菌株的筛选与鉴定.pdf

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1、314食品与药品FoodandDrug2013年第15卷第5期产剑麻皂苷水解酶菌株的筛选与鉴定邓天发，王京博，谢庆武(广西大学生命科学与技术学院，广西南宁530004)摘要：目的筛选能酶解剑麻皂苷并释放游离剑麻皂素的菌株。方法用薄层色谱法(TLC)初筛能酶解剑麻皂苷游离出剑麻皂素的菌株，再用酶活性比色测定和高效液相色谱法(HPLC)复筛目的菌株。通过形态学观察和ITS序列测定，初步鉴定菌种。结果筛选~lJ31株目的菌株，其中丝状真菌13株，细菌18株。丝状真菌的酶活性高于细菌。鉴定其中酶活性较高的4株真菌：菌种T1为黑曲霉，T2、T

2、3为链孢霉属，T4为青霉属。结论TLC可快速筛选酶解剑麻皂苷并释放游离剑麻皂素的菌种。黑曲霉、链孢霉和青霉均有较强的酶解剑麻皂苷并释放游离剑麻皂素的能力。关键词：剑麻皂素；皂苷水解酶；菌种；筛选中图分类号：Q93．331文献标识码：A文章编号：1672—979X(2013)05—0314-03ScreeningandIdentificationofSisalanaSaponinHydrolyticEnzymeProducingStrainsDENGTian—fa，WANGJing—bo，XIEQing—WH(CollegeofLif

3、eScienceandTechnology,GuangxiUniversity,Nanning530004，China)Abstract：ObjectiveToscreenthestrainswhichcanhydrolyzetheagavesisalanasaponinandreleasethetigogenin．MethodsUsingtheTLCassay,thestrainsthatcanhydrolyzetheagavesisalanasaponinandreleasethetigogeninwerefirstscreen

4、edout，thenthedestinationstrainswerescreenedoutagain，usingtheenzymaticcolorimetricdeterminationandHPLCdetermination．BymorphologicalobservationandITSsequencing，thestrainswerepreliminaryidentified．Results31destinationstrainswerescreenedout．amongwhich13strainswerefilamento

5、usfungiand18werebacteria．Theactivityofthehydrolyticenzymeofthefungiwashigherthanthatthebacteria．The4fungistrainsT1，T2，T3andT4withhigherenzymaticactivitywereidentifiedasAspergillusniger，Neurosporasitophila，andPenicillium，respectively．ConclusionUsingtheTLCassay,thescreen

6、ingofthestrainsthatcanhydrolyzetheagavesisalanasaponinandreleasethetigogeninwasaccelerated．Aspergillusniger，Neurosporasitophila，andPenicilliumallhavethecapacitytohydrolyzetheagavesisalanasaponinandreleasethetigogenin．KeyWords：tigogenin；saponinhydrolyticenzyme；strain；sc

7、reening剑麻皂素(tigogenin)具有抗炎、解热、镇痛、增强学农场等地采集。免疫、降低血糖、抗肿瘤、抗菌、降血脂、降血压等作1．2培养基用，应用广泛，可用于合成120多种激素类药物，还可应用平板筛选培养基：剑麻渣粉末30g，NaNO，2g，于食品、化妆品及畜牧业等行业。]。剑麻皂素在剑麻中以K2HPO41g，KC10．5g，MgSO4’7H2O0．5g，FeSO4‘7H2O甾体皂苷配基的形式存在，在其C3位~NC26位等通过糖苷0．01g，琼脂12g，水1000mL，pH自然。键与糖链(由葡萄糖、木糖、鼠李糖、半乳糖、阿拉

8、伯糖产酶培养基：剑麻渣粉末1g，葡萄糖O．25g，蛋白等组成)相连]。制备剑麻皂素，必须先水解与其直接相胨0．125g，K2HPO4O．025g，KC1O．0125g，MgSO4’7H2O连的糖苷键(以下简称皂苷键)。目前，国内提取剑