人牙髓细胞原代培养方法的研究.pdf

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1、华西医大学报;(D:96~98JWCUMS人牙髓细胞原代培养方法的研究赵瑚陈治清白薇四川大学华西口腔医学院材料学教研室(成都610041D[内容摘要)目的确定酶解消化法牙髓细胞原代培养的合适条件与时间0方法选取年轻患者因正畸拔除的完整和无龋坏牙齿取出牙髓分别采用胶原酶一步法消化牙髓组织30分钟及1~2~3小时胶原酶分步消化法组织块法和组织块酶解法进行原代培养0倒置显微镜台盼蓝染色观察细胞解离及存活状况免疫组化法鉴定细胞来源0结果胰酶消化2小时后组织块基本未解离0用0.1%胶原酶一步法消化1~2~3小时后组织块均彻底解离为单细胞基本无残余00.1%胶原酶消化

2、30分钟后组织块解离不完全00.1%胶原酶分步法消化1小时后组织解离彻底0台盼蓝染色表明经胶原酶一步法消化获得的牙髓细胞被台盼蓝着色的比例随消化时间减短而下降0分步法消化细胞着色率低于一步法0组织块酶解法的组织块解离~贴附和细胞游出状况均优于组织块法0结论I型胶原酶在37C持续振荡条件下消化1小时是彻底酶解消化人牙髓的最短时间0分步酶解法能获得比一步酶解法更高的活细胞数量0而从效果~操作难易和耗时多少等多方面因素综合考虑组织块酶解法是人牙髓组织原代培养的最佳方法0[关键词)牙髓细胞培养酶解[中图分类号)R781ThePrimaryCultureOfHuma

3、nTOOthPulpCellZhooHUChenZhigingBoiWei.Depa7tmentofBlomedlcalandBlomate7lalSclencesWestChlnaSchoolofStomatologySlch/anUnlUe7sltyChengdu610041China[Abstract)ObjectiveInthiSStudyWeeStabliShedtheOptimalcOnditiOnandduratiOnfOrtheprimarycul-tureOfthehumantOOthpulpcellWithcOllagenaSedige

4、StiOnmethOd.MethOdPulptiSSueWaSremOVedfrOmhealthyyOunghumanteetheXtractedfOrOrthOdOnticpurpOSeSandthenthepulpWaSdigeStedbycOllagenaSeSep-aratelyinduratiOnOf30minS1hr2hrS3hrS.AfterthedigeStiOntheViabilityanddigeStiOnefficiencyWeree-ValuatedbymicrOScOpyandtrypan-bluedying.ThecytOker

5、atinandVimentinWereimmunOcytOchemicallydetectedtOidentifythecellphenOtype.ThetiSSueeXplantcultureandtrypSindigeStiOnWereSetaScOntrOlS.ResultsAf-terdigeStiOnOf1hr2hrSOr3hrSlittletiSSuereSidueWaSleftWhilethereiSStillmuchtiSSueremainedafterdi-geStiOnOf30minS.TheViabilitydecreaSedWith

6、theelOngatiOnOfdigeStiOnduratiOn.COnclusiOn37CcOntinuingStirringand1hrOftypeIcOllagenaSedigeStiOnaretheOptimalcOnditiOnSfOrtheprimarycultureOfhumantOOthpulpWithdigeStiOnmethOd.[KeyWOrds)TOOthpulpPrimarycellcultureEnZymOlySiS人牙髓细胞体外培养体系是研究人牙髓细胞分优等品(GibcO公司D;35cm2塑料培养瓶(NunclOne化的主要体

7、外模型而人牙髓由于其组织量少细胞公司D;高糖型DMEM营养液(GibcO公司D;I型胶活性低比其他器官组织更难于进行原代培养0以原酶(GibcO公司D;胰蛋白酶(GibcO公司D;台式离往对其原代培养均采用组织块法[1~3]0我们在众多心机(Perkin-ElmerD0学者的研究基础上尝试以酶解法及酶解结合组织1.标本的获取及处理块法进行人牙髓细胞的原代培养确定了适宜的消采用临床10~25岁因正畸或阻生需要拔除的化时间和条件并与常规的组织块法进行了比较0健康~完整和无明显龋坏牙齿在高速涡轮机水冷却条件下轻轻打磨牙体表面以去除浅龋~牙周膜及残1材料和方法余牙

8、龈组织0然后在超净台上依次以碘酒75%酒1.1材料与仪器精生理盐水