不同冷冻保护剂对犊牛睾丸组织冷冻效果的研究.pdf

《不同冷冻保护剂对犊牛睾丸组织冷冻效果的研究.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、第３５卷第９期家畜生态学报Vol．３５No．９２０１４年９月ActaEcologiaeAnimalisDomasticiSep．２０１４倡不同冷冻保护剂对犊牛睾丸组织冷冻效果的研究倡王春伟，洪洁赟，张卫艺，吕妍，郭秋平，赵军，胡建宏（西北农林科技大学动物科技学院，陕西杨凌７１２１００）［摘要］通过探讨不同冷冻保护剂对犊牛睾丸组织冷冻保存的效果以及睾丸组织低损伤冷冻保存的机理，为保护珍稀濒危物种、恢复人类未成年男性生育能力等提供依据。研究将二甲基亚砜（DMSO）、甘油、丙二醇、蔗糖和葡萄籽原花青素（GSP）五种冷冻保护剂设置八个浓度梯度，用以进行犊牛睾丸组织的冷冻保存，７d后解冻，解冻后检

2、测睾丸组织内的一氧化氮（NO）、一氧化氮合酶（NOS）和细胞活率。结果表明，经１０％DMSO、丙二醇、蔗糖和GSP冷冻犊牛睾丸组织７d解冻后，组织细胞活率分别达到７７％、６２％、３４％和２４％，DMSO组优于其他组（P＜０．０５）；NO水平分别为０．５２、０．５１、０．６４和０．４９μmol／mgprot，NOS活性分别为１．０３、０．９８、１．０４和０．９６U／mgprot，GSP组优于其他组（P＜０．０５）。７．５％甘油冷冻犊牛睾丸７d解冻后，细胞活率、NO和NOS分别为４１％、０．５４μmol／mgprot和１．０７U／mgprot，优于组内其他浓度（P＜０．０５）。表明１０％DM

3、SO能有效地冷冻保存犊牛睾丸组织。［关键词］犊牛睾丸组织；冷冻保护剂；细胞活率；一氧化氮；一氧化氮合酶［中图分类号］S８１１．６［文献标识码］A［文章编号］１００５‐５２２８（２０１４）０９‐００４９‐０６睾丸组织的冷冻保存尤其是幼龄动物睾丸组织法冻存睾丸组织，睾丸组织特异性基因TESK１和的冷冻保存为雄性动物生殖细胞的保存、珍稀濒危pgk２表达均正常，组织形态改变较‐小。在国外，［９］物种的保护以及人类辅助生殖等提供了新的途Avarbock等首次报道，精原干细胞用常规冷冻方［１］径。冷冻睾丸组织能够避免酶解造成细胞存活率法长期保存后能够保持增殖和分化能力，解冻后睾［１０］降低，机械分离

4、破坏细胞间连接，造成细胞缺氧加重丸组织中大约１／３的细胞复活；Yildiz等检测了［２］等影响。由于人们对幼龄动物睾丸冷冻的机理还冷冻前后睾丸组织中精子发生和睾酮的生成，结果不甚清楚，冷冻‐解冻后睾丸组织活性的变化、精原表明经DMSO冷冻保存睾丸组织后，获得４６．６％［１１］干细胞微生境的恢复能力以及影响睾丸组织冷冻效的组织存活率以及最高的睾酮水平；Paweena等［３‐４］果的关键因素等仍处于探索阶段。尽管如此，目分析了冷冻对睾丸精子质膜和DNA以及曲细精管的前国内外已经开展了幼龄动物睾丸组织冷冻方面的损伤，质膜完整率减少了１３．０％，DNA完整率减少了［５］研究。在国内，李莲军等研究

5、表明，完整小鼠睾丸６．６％。纵观国内外的研究，目前对睾丸组织冷冻效冷冻后细胞复苏率低于６０％，但精原干细胞能够正果的评价主要侧重在于对冷冻前后组织形态学变化，［６］常贴壁、生长和分裂；王晓英利用不同冷冻保护剂而对睾丸组织的生化指标的研究尚没有相关报道。冷冻未成熟小鼠睾丸组织，结果发现（Dimethylsul‐另外，目前对睾丸组织冷冻保存的研究主要集中在小foxide，DMSO）组未受损的精原细胞为７１％，甘油鼠等实验动物，而关于家畜尤其是牛睾丸组织的冷冻［７］（GLY）组为５７％。朱海鲸等研究表明，DMSO和保存未见报道。乙二醇对羊睾丸组织具有良好的冷冻保护作用，经在冷冻保存过程中，睾丸

6、组织会产生一定量的５％～１０％DMSO冷冻保存后，羊睾丸组织总细胞自由基，当自由基的产生超出自身抗氧化系统的清［８］活率高达６５．８７％。李淼等研究发现，玻璃化方除能力时，其毒性作用会影响睾丸的生精能力。一倡［收稿日期］２０１４‐０５‐１９，修回日期：２０１４‐０６‐０２［基金项目］西北农林科技大学基本科研业务费专项资金（QN２０１１０６１）；西北农林科技大学大学生创新创业训练计划项目（１３１０７１２０１６）［作者简介］王春伟（１９８７‐），男，山东诸城人，硕士研究生，主要从事动物生殖生理调控方面的研究。E‐mail：５２５０７１４４８＠qq．com倡［通讯作者］胡建宏（１９６９‐），男

7、，陕西白水人，博士，教授，主要从事家畜生殖生理调控方面的教学与科研工作。50家畜生态学报第３５卷氧化氮（nitricoxide，NO）和一氧化氮合酶（nitricNOS的活性，揭示影响睾丸组织冷冻效果的关键因oxidesynthase，NOS）广泛存在于哺乳动物的生殖素，旨在初步建立犊牛睾丸组织低损伤冷冻保存体系统内，NO是一种不稳定信使小分子，具有很强的系。为人类未成年男性肿瘤患者、不育症患者生育自由基氧化特征，NOS能催化L‐精