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1、第23卷第1期无锡轻工大学学报Vol.23No.12004年1月JournalofWuxiUniversityofLightIndustryJan.2004文章编号:10092038X(2004)0120049205麦胚凝集素红细胞凝集活性检测方法的改进单良, 姚惠源(江南大学食品学院,江苏无锡214036)摘 要:对红细胞进行蛋白酶处理、戊二醛固定,采用pH7.2等渗磷酸盐作为缓冲液,用光径0.5cm比色池测定凝集活性,读取测定终点的时间以2h为宜.建立的检测方法简单易行,得出的结果具有良好的灵敏度及重现性.关键词:麦胚凝集素;红细胞凝集活性;检测方法中图分类号:R446文献
2、标识码:AAnImprovedProtocolforDeterminationofHemagglutinatingActivityofWheatGermAgglutininSHANLiang,YAOHui2yuan(SchoolofFoodScienceandTechnology,SouthernYangtzeUniversity,Wuxi214036,China)Abstract:Theprocedurefordeterminationofhemagglutinationactivity(HA)ofwheatgermagglutinin(WGA)wasimproved.Maj
3、orimprovementsinclude:1).theselfsedimentationoferythrocyteswasdeductedinthedefinitionandcalculationofHA;2).erythrocytesweresensitizedwithtrypsinandfixedwithglutaraldehydepriortoHAtests;3).pH7.2isotonicphosphatebufferedsalinewasusedastheworkingliquid;4).UVabsorptionoferythrocytesuspensionswas
4、takenusing0.5cmpath2lengthcells;and5).appropriateend2pointwasdeterminedas2hoursafteraddingWGAintothesuspension.Theprotocolthusderivedwasprovedtobeconvenient,capableofhavinggoodsensitivityandreproducibility.Keywords:wheatgermagglutinin(WGA);hemagglutinatingactivity(HA);determination 麦胚凝集素(wh
5、eatgermagglutinin,WGA)是个二硫键稳定其结构,这些结构域依次排列,以“头具有结合甲壳素功能的凝集素家族(Gramineae)中对尾”的方式形成二聚体,形成广泛的单体/单体界的一员,与其它家族相比,这类凝集素的独特性在面.这种界面容纳接触亚基之间8个独立的糖结合于其分子内部的四重折叠结构具有多个结合位点.位点(4个异常位点),其特点是具有一簇2～3个芳[1,2]WGA以3种变异体(同功凝集素)的形式存在,三香氨基酸.凝集素与复合多糖的特异性相互作者都是36000的二聚体,由2个相同的具有171个用参与噬菌作用、细胞内吞作用、细胞内运送、信号残基的多肽链缔合而成
6、,每条多肽链包含4个重复转换、细胞2细胞识别、发炎过程、细胞基质粘着、调的42～43个残基的橡胶蛋白型结构域.这些结构理作用、细胞生长控制、细胞调节和分化、细胞运送[5]域以相似的方式折叠而成,并由相对位置相同的4以及肿瘤细胞转移等.收稿日期:2003205213;修回日期:2003209211.作者简介:单良(19692),男,山东新泰人,食品科学与工程博士研究生.50无 锡 轻 工 大 学 学 报 第23卷 WGA具有特定的细胞凝集活性,其活性可以线.取不同稀释倍数的WGA溶液和标准红细胞悬利用天然的、酶处理的、戊二醛固定的人、兔、绵羊液各1mL,先
7、后装入0.5cm×8cm的试管,盖紧橡血红细胞,或者(KB)细胞、成纤维细胞配制成一定皮塞后立即上下颠倒3次,随即装入光径0.5cm比浓度的悬液,将1mg/mL的WGA溶液进行系列2色池,在分光光度计上对其A620进行时间扫描.根倍稀释,然后向其中加入等量的细胞悬液,在一定据读取的A620可以从对应的标准曲线上换算得到条件下静置一定时间后,利用肉眼观测、比色等方留在悬液中红细胞的百分数.法进行判定.在建立标准的红细胞凝集2红细胞抑制1.2.4WGA红细胞凝集活性的测定将WGA配114实验方法
