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时间:2018-11-17
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1、应用红细胞凝集素检测方法对一幼儿园食物中毒检测分析刘寒冰1郭振坤1吕厚明1赵禹1谢瀛1杨红英3吴艳丽3(1木溪市疾病预防控制中心117000;2木钢卫生防疫站117000;3木溪市平山区疾控中心117000)【摘要】目的2011年6月3日木溪一幼儿园发生食物中毒事件,共有25名幼儿、6名老师发病,均与食用芸豆(俗称一点红芸豆)有关,为了快速准确查明中毒原因,以预防发生类似食物中毒,木实验室应用微量凝集法对幼儿园留样炖芸豆,炒芸豆丝,患者呕吐物进行红细胞凝集素含量检测。方法在实验室检测过程中,应用了微量凝集检测红细胞凝集素的方法,并与相关性对照
2、试验进行比较。结果在剩余炖芸豆,炒芸豆丝样品,5份呕吐物中均检出大量红细胞凝集素,而加热彻低的对照物中未检出。结论木起食物中毒的原因是食用芸豆(一点红)未经彻底加热,加工方式不当,毒素未被彻底破坏造成;结论微量凝集检测红细胞凝集素方法,在菜豆食物中毒事件检测实际应用中快捷、准确、方便、实用。【关键词】食物中毒红细胞凝集素微量凝集法1流行病学调查1.1中毒发生经过木溪某幼儿园159名幼儿于2011年6月3日11:00时就餐,24名老师于12:00就餐。14:10开始有老师发病,至3H22:00时共有25名幼儿、6名老师以恶心、呕吐为主要症状进入
3、医院中心门诊儿科、急救中心内科急诊室进行检查。经医院初步诊断有13名患者为急性胃炎,其中幼儿患者11名、老师患者2名进行输液治疗。1.2主要临床表现:主要症状为恶心、呕吐6次(为胃内容物)。幼儿首发病例2.5岁,发病时间为6月3H15:20时,主要症状为恶心、呕吐(为胃内容物)头晕、上腹部疼痛症状,无发热症状。1.3基本情况调查:该幼儿园大约有10—20名幼儿于6月3日在园内午睡后,从15:20吋陆续有出现恶心、呕吐等症状。接到报告后本钢卫生防疫站立即向市卫生局报告,在市卫生局指示下,本钢卫生防疫站立即组织相关专业人员赶赴本溪新事业发展责任冇
4、限公司平山幼儿园、本钢总医院中心门诊儿科、急救中心内科急诊进行现场卫生学及流行病学调查,现将调查情况报告如下:中毒潜伏期为2—11小吋,平均潜伏期为4.5小吋,主要症状为:恶心18人(幼儿患者12人、老师患者6人);呕吐18人(幼儿患者12人、老师患者6人,呕吐次数为1一6次,为胃内容物)。6月3日午餐食谱是:幼儿就餐食品为炒芸豆丝(一点红芸豆)溜肉段(鸡肉)白米饭;老师就餐食品为乱炖(一点红芸豆、甘蓝、茄子、西红柿、土豆)白米饭;幼儿、老师有共同进食史均食用一点红芸豆、白米饭。幼儿就餐食物溜肉段(鸡肉)油炸后冋锅制成,芸豆丝是炒制;老师就餐
5、食物乱炖是炖制;米饭当餐蒸制。2材料与方法2.1检验方法与试剂:用微量凝集法检测样品中红细胞凝集素[1】,常规方法做细菌性食物中毒检验[2】。PVC血凝板(96孔U型板),微量移液器,新鲜羊血。2.2样品来源:老师中毒患者呕吐物2份,幼儿患者呕吐物3份剩余炖芸豆角1份;炒芸豆丝1份,市场购买芸豆(俗称架豆王)作为阳性对照1份,家庭食用炖芸豆剩余作为阴性对照1份。2.3微量凝集法操作程序:2.3.1制备0.5%羊血球,取羊血1ml用生理盐水2000r/min离心洗涤3次,用微量移液器取500ul沉淀红血球,加入100ml生理盐水中。2.3.2样
6、品处理:分别取样品各5g,加入10ml生理盐水研磨,呕吐物调PH值至中性,这些样品经2000r/min离心,取上清液备用。2.3.3加样操作:每份样品在血凝板上选择9孔,第一次第2—9孔加入lOOul生理盐水,第二次第1.2孔分别加入lOOul检样,再从第2孔吸出lOOul加到第3孔中,如此操做至第8孔,从第8孔吸出lOOul弃掉。第三次1一9孔分别加入0.5%羊血球lOOul。加样后,置37°C水浴4小吋后观察结。2.3.4记录结果以++++、+++、++、+,一记录结果,++++全部凝集(生面豆籽第1孔为阳性对照);+++大部分凝集;++
7、部分凝集;+小部分凝集;一不凝集血球沉淀于孔底,液体澄清,与第9孔不加样品的阴性对照相同。红细胞凝集试验结果,凡稀释度最高而旮大部分凝集++者,判定为样品凝集效价,豆角稀释后样品从第1一8孔,凝集效价记做13、1:6、1:12、1:24、1:48、1:96、1:192、1:284。3结果3.1所冇样品经常规细菌检验,未检出致病菌;化学毒物分析结果呈阴性。3.2呕吐物,芸豆样品,微量凝集法检测红细胞凝集素结果见表1。表1食物中毒样品红细胞凝集素检测结果4结果讨论分析4.1菜豆角(芸豆统称)中毒近年来发病率极高,当地屡冇发生。本次幼儿园发生多名儿
8、童强烈呕吐,造成家长恐慌,有的四处寻医,不知所措。经卫生部门积极调查,采样。本实验室应用微量凝集检测红细胞凝集素的方法,在短时间内得出结论,判定本次事件是一起食用芸
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